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红霉素微生物检定法操作及注意事项

许英俊
录入时间:2020-5-13 10:04:27 来源:青岛海博生物

一、红霉素概述

 

  红霉素系大环内酯类抑菌性抗生素,但在高浓度时对高度敏感的细菌也有杀菌作用。临床上主要用于治疗支原体肺炎、沙眼衣原体引起的新生儿结膜炎、婴儿肺炎、生殖泌尿道感染、军团菌病、皮肤软组织感染,空肠弯曲菌肠炎以及梅毒、痤疮等症。本品为白色或类白色的结晶或粉末,在甲醇、乙醇或丙酮中易溶,在水中极微溶解。本品在pH<6时易被破坏。红霉素制剂肠溶剂为主要剂型,以克服红霉素对酸的不稳定性及降解物对胃肠道的刺激等缺点,此外还有红霉素眼膏、软膏及栓剂等。

 

二、2015版中国药典效价测定方法及注意事项

 

  (1)培养基:抗生素1号培养基(pH为7.8~8.0)

  (2)试验菌:短小芽孢杆菌(CMCC(B)63202)

  (3)缓冲液:取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g,加水使其成1000ml,滤过,在115℃温度下灭菌30min,制成pH值为7.8的磷酸盐缓冲液。

  (4)双碟的制备:菌层培养基菌悬液的量约为培养基量的2%,加菌悬液量可视抑菌圈大小及清晰程度进行调整。

  (5)制备供试溶液

   A、红霉素原料药供试溶液:精密称取该供试品适量(约相当于红霉素50mg),置50ml的量瓶中,加乙醇(每10mg红霉素加4ml乙醇)溶解后,用灭菌水制成每1ml中约含1000单位的溶液,再用磷酸缓冲液(pH7.8)制成抗生素浓度范围为5.0-20.0单位/ml的高、低剂量溶液,即得。

   B、红霉素肠溶衣片供试溶液:取本品4片,研细,用乙醇适量(红霉素0.25g,加乙醇25ml)研磨使溶解,用灭菌水制成每1ml中约含1000单位的溶液,再用磷酸盐缓冲液(pH7.8)制成抗生素浓度范围为5.0-20.0单位/ml的高低剂量溶液,即得。

   C、红霉素软膏供试溶液:取本品,精密称取适量(约相当于红霉素10mg),置分液漏斗中,加石油醚20ml,缓缓振摇,使基质溶解,用磷酸盐缓冲液(pH为7.8-8.0)提取4次,每次约25ml,合并提取液,置100ml量瓶中,加磷酸盐缓冲液(pH为7.8-8.0)至刻度,制成每1ml中约含1000单位的溶液,再用磷酸盐缓冲液制成抗生素浓度范围为5.0-20.0单位/ml的高、低剂量溶液,即得。

  (6)培养温度和时间:培养温度为35-37℃,培养时间为14-16h。

 

三、测定中的关键点、易出现的问题及注意事项

 

  (1)称量:本品微有引湿性,称取样品时除注意准确称量外,特别是环境湿度较高时,尚需注意称量过程中的吸湿问题,以免引入误差。

  (2)供试品制备:检测中曾发现因红霉素溶解不完全,使含量测定结果低的情况。溶解供试品时,尤其是制剂,因辅料对主药的包裹吸附等作用,影响红霉素的溶出,应用超声处理等使其完全溶解。

  (3)培养基:红霉素含量测定,对培养基的质量要求较苛刻。尽量选择批量生产的质量稳定性好的培养基进行测定(我公司有成品干粉培养基,检测效果好,可购买使用)。

  (4)缓冲液:USP23版采用pH8.0磷酸盐缓冲液稀释样品,而中国药典采用pH7.8的磷酸盐缓冲液,经比较二者对效价测定结果无明显影响。

  (5)双碟的制备:中国药典对红霉素品种双碟的制备没有特殊的要求。底层培养基冷却凝固后,铺加菌层培养基前,应注意保温,一般可以将双碟放置在37℃的恒温箱中,临加上层培养基时取出。待菌层完全冷却凝固后,再放置牛津杯(也可用我公司生产的四联式牛津杯),牛津杯稳定后,开始滴加药液。

  (6)滴加药液:每组滴加的双碟数以不超过5个为宜,以免扩散时间相差过大,造成结果误差。


   注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。

 

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