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硫乙醇酸盐流体培养基制备及常见问题解答

纪旭艳
录入时间:2020-5-26 10:27:08 来源:青岛海博生物

一、用途及介绍

 

  用途:此培养基常用于药品及生物制品中的需氧/厌氧菌检验及厌氧菌的增菌培养。

  培养基状态和性质:制备好的硫乙醇酸盐流体培养基呈淡黄色透明流体状,有一定黏度,上下分层。上层由于接触空气中的氧气,培养基内含的刃天青显淡红色,需氧菌可在此处生长。下层为厌氧层,呈淡黄色,厌氧菌可在此处生长。

  优点:硫乙醇酸盐流体培养基中因含有少量琼脂,培养基内无液体对流现象,且含有还原性的胱氨酸、硫乙醇酸钠,因此可以稳定地保持下层的厌氧环境。在进行厌氧菌的增菌培养时,无需借助厌氧罐、厌氧培养箱等设备,也无需覆盖液体石蜡,即可达到良好的培养效果,因此非常适合用于厌氧菌的复苏及增菌培养。

 

二、使用方法及注意事项

 

  培养基制备:参照标签,按比例称取培养基加热溶解于纯化水中,分装至试管或瓶中,121℃高压灭菌,冷却后备用。

 

  注意事项:

  1.培养基中含有少量琼脂,因此在灭菌前需加热煮沸至培养基内的琼脂完全溶解且分布均匀,方可进行分装,灭菌;

  2.培养基分装容器时,装量应与容器比例合适,选择细高型容器分装更有利于减少氧化层的高度,若分装密闭容器中空气较多,可充入氮气后再进行密封;

  3.使用前注意观察培养基氧化层的高度,在供试品检查前,培养基氧化层高度不能超过培养基深度的1/5;若超过1/5,可对培养基进行沸水浴加热驱氧,只限加热一次;

  4.硫乙醇酸盐流体培养基不可振荡培养,只能静置培养。振荡会使培养基上下层产生液体对流,无法维持下层培养基的无氧状态,因此会导致厌氧菌不能生长。

 

三、常见问题

 

  1.制备好的培养基整瓶呈现淡黄色,看不到红色氧化层是怎么回事?

 

  答:通常在密闭容器里的硫乙醇酸盐流体培养基会出现这个现象。硫乙醇酸盐流体培养基上层只有接触氧气才会变红,若上层没有氧气接触,就会整体呈淡黄色。自制密闭灭菌后的培养基,若容器内残留空气很少,或灭菌前进行了充氮气排氧,灭菌后可能会看不到氧化层。

 

  2.灭菌后培养基是澄清的,冷却后出现部分白色絮状物,是什么原因?

 

  答:硫乙醇酸盐流体培养基内有少量琼脂,如果配制不当,琼脂未充分溶解分布均匀,灭菌冷却后聚集的琼脂凝固成团块,就会出现白色絮状物。因此在灭菌前必须加热至琼脂完全溶解并充分搅拌,使琼脂在培养基中分布均匀,再进行高压灭菌,冷却后的培养基就是澄清的淡黄色透明流体状。

 

  3.灭菌后的培养基颜色偏深黄,且pH偏低不合格,是什么原因?

  

  答:这种情况一般是灭菌过度造成的。培养基中的酵母浸粉和葡萄糖在灭菌过度后易出现糖焦化现象,造成颜色偏深,pH下降,严重时可能观察不到氧化层。因此在培养基灭菌结束后,需及时从灭菌锅中取出,避免长时间灭菌或保温,更不可重复高压灭菌。

 

  4.灭菌后的培养基,分装试管使用时,整根试管变红色,是否还能使用?

 

  答:此培养基建议先加热煮沸溶解,分装,再灭菌。如先灭菌后分装,由于分装过程中培养基接触氧气,刚分装结束时,部分培养基可能呈现全红色,一般室温静置1h左右可重新见到分层现象。如静置后仍然整体培养基呈红色不分层,可沸水浴加热驱氧,冷却后即可重新出现分层。重新分层的培养基可正常使用。

 

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