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| 青岛高科园海博生物技术有限公司技术资料 |
| 微生物检测的各种培养基 |
| 录入时间:2006-6-26 11:53:14
来源：青岛海博生物技术部 |
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微生物检测的各种培养基
名称 用途
1 革兰氏染色液 微生物染色
2 营养琼脂 细菌培养和细菌总数测定
3 孟加拉红培养基 霉菌、酵母菌计数
4 乳糖胆盐发酵管 大肠菌群，粪大肠菌群及大肠杆菌的测定
5 乳糖发酵管 供大肠菌群证实试验用
6 三糖铁琼脂 肠杆菌科细菌的生化反应筛选
7 伊红美兰琼脂 分离肠道致病菌
8 缓冲蛋白胨水 沙门氏菌检验中的前增菌
9 四硫酸钠煌(TTB)绿增菌液 沙门氏菌检验中的前增菌
10 GN增菌液 志贺氏菌的前增菌
11 亚硒酸盐胱氨酸增菌液 沙门氏菌选择性增菌培养
12 SS琼脂 沙门氏菌、志贺氏菌的分离
13 V-P半固体琼脂 细菌检验的V-P试验
14 7.5%氯化钠肉汤 金黄色葡萄球菌的增菌培养
15 Baird-Parker培养基 金黄色葡萄球菌的检验
16 酸性肉汤 酸性罐头食品商业无菌检验
17 尿素琼脂基础 细菌检验中的尿素酶试验
18 赖氨酸脱羧酶培养基 细菌检验中的赖氨酸脱羧酶试验
19 吲哚培养基 细菌靛基质试验，亦称色氨酸肉汤
20 硝酸盐氰化钾培养基 细菌检验中的硝酸盐还原试验和氰化钾试验
21 生理盐水 检样的溶解与稀释
1革兰氏染色法
1.1革兰氏染色液
1.1.1结晶紫染色液
成份： 结晶紫 1.0g
95%乙醇 20.0ml
1%草酸铵水溶液 80.0ml
1.1.2革兰氏碘液
成份： 碘 1.0g
碘化钾 2.0g
蒸馏水 300.0ml
1.1.3 95%乙醇
1.1.4沙黄复染液
成份： 沙黄 0.25g
95%乙醇 10.0ml
蒸馏水 90.0ml
1.2染色法
1.2.1将涂片在火焰上固定。
1.2.2初染：滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。
1.2.3媒染：滴加革兰氏碘液，作用1 min，水洗。
1.2.4脱色：滴加95%乙醇脱色，水洗；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s，水洗。
1.2.5复染：滴加沙黄复染液，染1min，水洗，待干，镜检。
1.2.6结果判定：革兰氏阳性菌呈紫色；革兰氏阴性菌呈红色。
2一般培养基和专用培养基
2.1营养琼脂
2.1.1用途：用于一般细菌培养及细菌总数测定。
2.2.2成份（g/L）：
蛋白胨 10.0
牛肉粉 3.0
氯化钠 5.0
琼脂 15.0
PH7.3±0.1
5.2.2.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121℃15 min高压灭菌备用。
5.2.2.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。
2.2孟加拉红培养基
2.2.1用途：用于粮食、食品、饮料中霉菌、酵母菌计数。
2.2.2成份（g/L）：
蛋白胨 5.0
葡萄糖 10.0
磷酸二氢钾 1.0
硫酸镁 0.5
孟加拉红 0.03
氯霉菌 0.1
琼脂 15.0
2.2.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121℃20 min高压灭菌备用。
2.2.4注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。
2.3乳糖胆盐发酵管
2.3.1用途：用于大肠菌群，粪大肠菌群及大肠杆菌的测定。
2.3.2成份（g/L）：
蛋白胨 20.0
胆盐 3.0
乳糖 5.0
溴甲酚紫 0.01
PH7.4±0.1
2.3.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，115℃15min高压灭菌，双料乳糖胆盐发酵管除纯水外，其它成份加倍。
2.3.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。
2.4乳糖复发酵管
2.4.1用途：供大肠菌群证实试验用。
2.4.2成份（g/L）：
蛋白胨 20.0
乳糖 10.0
溴甲酚紫 0.01
PH7.4±0.1
2.4.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装10ml于有倒立发酵管的试管中，115℃15min高压灭菌备用。
2.4.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。
2.5三糖铁琼脂
2.5.1用途：主要用于肠杆菌科细菌的生化反应筛选。
2.5.2成份（g/L）：
蛋白胨 20.0 酚红 0.025
牛肉膏 3.0 氯化钠 5.0
乳糖 10.0 硫酸亚铁铵(6H2O) 0.5
蔗糖 10.0 硫代硫酸钠 0.5
琼脂 12.0 葡萄糖 1.0
PH7.4±0.1
2.5.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至溶解，分装试管，115℃15min高压灭菌制成高层斜面备用。
2.5.4注意事项：保存于阴凉干燥处，密封、避光。
2.6伊红美兰琼脂
2.6.1用途：弱选择性培养基，用于分离肠道致病菌。
2.6.2成份（g/L）：
蛋白胨 10.0
乳糖 10.0
磷酸氢二钾 2.0
琼脂 15.0
伊红 0.4
美兰 0.065
PH7.1±0.2
2.6.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热溶解，121℃15min高压灭菌，冷至55℃倾注平板备用。
2.6.4注意事项：保存于阴凉干燥处，密封、避光。
实施纠正措施
2.7缓冲蛋白胨水
2.7.1用途：用于沙门氏菌检验中的前增菌。
2.7.2成份（g/L）：
蛋白胨 10.0
氯化钠 5.0
Na2HPO4(12H2O) 9.0
KH2PO4 1.5
最终PH7.2±0.1
2.7.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，每瓶225ml，121℃15min高压灭菌备用。
2.7.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。
2.8四硫酸钠煌(TTB)绿增菌液
2.8.1用途：用于沙门氏菌检验中前增菌。
2.8.2成份（g/L）：
A基础培养基
多胨或胨 5.0g
胆盐 1.0g
碳酸钙 10.0g
硫代硫酸钠 30.0g
蒸馏水 1000ml
B碘溶液
碘 5.0g
碘化钾 6.0g
蒸馏水 20ml
2.8.3制法：将基础培养基的各成分加入蒸馏水中，加热溶解，分装每瓶100 ml。分装时应随时震荡，使其中的碳酸钙混匀。121℃高压灭菌15min备用，临用时每100 ml基础培养基中加入碘溶液2 ml、0.1%煌绿溶液1 ml。
5.2.8.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。
2.9GN增菌液
2.9.1用途：用于志贺氏菌的前增菌液
2.9.2成份（g/L）：
胰蛋白胨 20.0 g
葡萄糖 1.0 g
甘露醇 2.0 g
柠檬酸钠 5.0 g
去氧胆酸钠 0.5 g
磷酸氢二钾 4.0 g
磷酸二氢钾 1.5 g
氯化钠 5.0 g
蒸馏水 1000ml
2.9.3制法:按上述成分配好，加热使溶解，校正pH。分装每瓶225 ml，115℃高压灭菌15min。
2.9.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。
2.10亚硒酸盐胱氨酸增菌液
2.10.1用途：用于沙门氏菌选择性增菌培养。
2.10.2成份（g/L）：
蛋白胨 5.0
乳糖 4.0
磷酸氢二钠 10.0
亚硒酸氢钠 4.0
L-胱氨酸 0.1
PH7.0±0.1
2.10.3制法: 称取各成份溶于灭菌纯水中，在无菌容器中溶解，分装，每瓶100ml，备用。
2.10.4注意事项：于4℃冰箱中密封保存。
2.11 SS琼脂
2.11.1用途：用于沙门氏菌、志贺氏菌的分离。 2.11.2成份（g/L）：
蛋白胨 5.0 牛肉粉 5.0
乳糖 10.0 三号胆盐 3.5
柠檬酸铁 10.0 柠檬酸钠 8.5
中性红 0.025 硫代硫酸钠 8.5
琼脂 15.0 煌绿 0.00033
PH7.0±0.1
2.11.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸溶解，冷至55℃，倾注平板备用。
2.11.4注意事项：A保存于阴凉干燥处，密封、避光。
B勿高压灭菌。
2.12V-P半固体琼脂
2.12.1用途：用于细菌检验的V-P试验。
2.12.2成份（g/L）：
蛋白胨 12.0
酵母膏 1.0
葡萄糖 10.0
氯化钠 5.0
琼脂 3.0
PH7.3±0.1
2.12.3制法: 称取各成份于纯水中，加热煮沸至溶解，分装试管，每管1～1.5ml，121℃10min高压灭菌，立即取出冷却备用。
2.12.4配制试剂：
甲液： α-萘酚 6.0g
无水乙醇溶液 100.0ml
乙液： 氢氧化钾 40.0g
肌酸 0.3g
蒸馏水 100.0ml
先将氢氧化钾溶于水中，再加入肌酸。
甲液和乙液保存于4℃冰箱内，可使用2个月。
2.12.5试验方法：挑取琼脂培养物接种V-P培养基中，于36±1℃培养24h±2h，将甲液0.2ml（约6滴）加入试管中，摇混均匀，再加入乙酸0.1ml（约3滴），再摇混均匀。
阳性反应立即或15min内呈现红色，阴性反应为铜色。阴性结果在1h后再做一次检查。有些试管在数小时后红色会逐渐消失，此仍作阳性反应。
2.12.6注意事项：保存于阴凉干燥处，密封、避光。
2.13 7.5%氯化钠肉汤
2.13.1用途：用于金黄色葡萄球菌的增菌培养。
2.13.2成份（g/L）： 蛋白胨 10.0
牛肉粉 3.0
氯化钠 75.0
PH7.4±0.1
2.13.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，每瓶50ml，121℃15min高压灭菌备用。
5.2.13.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。
2.14 Baird-Parker培养基
2.14.1用途：用于食品中金黄色葡萄球菌的检验。
2.14.2成份（g/L）：
胰蛋白胨 10.0 丙酮酸钠 10.0
牛肉膏 5.0 甘氨酸 12.0
酵母膏 1.0 氯化锂(6H2O) 5.0
琼脂 20.0 PH7.4±0.1
2.14.3用法: 称取各成份于纯水中，加热煮沸至溶解，分装每瓶95ml，121℃15min高压灭菌，冷至50℃时，每95ml加入5ml亚碲酸钾卵黄增菌液。
5.2.14.4注意事项：A保存于阴凉干燥处，密封、避光。
B平板冰箱贮存不超过48小时。
2.15酸性肉汤
2.15.1用途：用于酸性罐头食品商业无菌检验。
2.15.2成份（g/L）：
多价蛋白胨 5.0
酵母粉 5.0
葡萄糖 5.0
磷酸氢二钾 4.0
PH5.0±0.2
2.15.3制法: 称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121℃20 min高压灭菌备用。
2.15.4注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。
3生化试验培养基和试剂
3.1尿素琼脂基础
3.1.1用途：用于细菌检验中的尿素酶试验。
3.1.2成份（g/L）：
蛋白胨 1.0
葡萄糖 1.0
氯化钠 5.0
磷酸二氢钾 2.0
酚红 0.012
琼脂 15.0
PH6.8±0.1
3.1.3制法: 称取各成份于纯水中，加热煮沸至完全溶解，121℃15min高压灭菌，冷至55℃以无菌技术每95ml溶液加入40%尿素水溶液5ml，混匀后制成斜面备用。 3.1.4试验方法：挑取琼脂培养物接种，在36±1℃培养24h，观察结果。尿素酶阳性者出于产碱而使培养基变为红色。
3.1.5注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。
3.2赖氨酸脱羧酶培养基
3.2.1用途：用于细菌检验中的赖氨酸脱羧酶试验。
3.2.2成份（g/L）：
酵母膏 3.0
葡萄糖 1.0
L-赖氨酸 5.0
溴甲酚紫 0.016
PH6.7±0.1
3.2.3制法: 称取各成份于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装试管，每管1-1.5ml，121℃15min高压灭菌备用。 3.2.4试验方法：从琼脂斜面上挑取琼脂培养物接种，在36±1℃培养18-24h，观察结果。赖氨酸脱羧酶阳性者出于产碱而使培养基变为紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变黄色。对照管应为黄色。
3.2.5注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。
3.3吲哚培养基
3.3.1用途：用于细菌靛基质试验，亦称色氨酸肉汤。
3.3.2成份（g/L）：
蛋白胨 10.0
氯化钠 5.0
DL-色氨酸 1.0
PH7.4±0.1
3.3.3用法: 称取各成份于纯水中，加热煮沸至完全溶解，121℃15min高压灭菌备用。
3.3.4配制柯凡克试剂：对二甲氨基苯甲醛 10.0g
戊醇 150.0ml
浓盐酸 50.0ml
将色泽鲜明干燥的对二甲氨基苯甲醛溶于戊醇中，缓慢搅拌加入盐酸，加热至60℃，呈深黄色，静置6-7h，变成黄色即可使用。试剂宜少量配制，不用时保存于4℃冰箱内。久存后试液变成褐色不可使用。
3.3.5试验方法：挑取琼脂培养物接种，在36±1℃培养24h，滴加柯凡克试剂0.1ml。阳性反应出现红色环；阴性反应为黄色环。
5.3.3.6注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。
3.4硝酸盐氰化钾培养基
3.4.1用途：用于细菌检验中的硝酸盐还原试验和氰化钾试验。 3.4.2成份（g/L）：
蛋白胨 10.0
氯化钠 5.0
磷酸二氢钾 0.225
磷酸氢二钠 5.64
硝酸钾（无亚硝酸盐）1.0
5g/L氰化钾溶液 10.0
PH6.8±0.1
3.4.3用法: 称取各成份于纯水中，加热煮沸至完全溶解，121℃15min高压灭菌，每100ml无菌加入0.5%氰化钾溶液1ml，分装无菌试管备用；同时将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。
3.4.4试验方法：挑取琼脂培养物接种，先接种于吲哚培养基中，混匀，然后灼烧接种环，再沾取吲哚培养基少许接种于氰化钾培养基中，于36±1℃培养24h，观察培养液有无混浊，培养液出现混浊，即有细菌生长，为阳性反应（不抑制）；经2天培养，细菌不生长为阴性反应（抑制）。
3.4.5注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。
3.5生理盐水
3.5.1用途：用于检样的溶解与稀释。
3.5.2成份：（g/L）：
氯化钠 8.5g
纯水 1000.0ml
3.5.3制法：称取氯化钠于纯水中，至完全溶解，分装，121℃高压灭菌15min。
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