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嗜热链球菌抑制法检测鲜乳中抗生素残留



录入时间:2014-2-11 9:28:21 来源:海博生物

 

 

操作步骤

原理:检样经过 80 ℃杀菌后,添加嗜热链球菌菌液。培养一段时间后,嗜热链球菌开始增殖。这时候加入代谢底物 TTC,若该样品中不含有抗生素或抗生素的浓度低于检测限,嗜热链球菌将继续增殖,还原 TTC 成为红色物质。相反,如果样品中含有高于检测限的抑菌剂,则嗜热链球菌受到抑制,因此指示剂 TTC 不还原,保持原色。

检验程序

活化菌种:取一接种环嗜热链球菌菌种,接种在 9 mL 灭菌脱脂乳中,36 ℃±1 ℃培养 12 h~15h 后,置 2 ℃~5 ℃冰箱保存备用。每15 d 转种一次。

测试菌液:将经过活化的嗜热链球菌菌种接种灭菌脱脂乳,36 ℃±1 ℃培养 15 h±1 h,加入相同体积的灭菌脱脂乳混匀稀释成为测试菌液。

培养操作:取检样 9 mL,置 18 mm×180 mm 试管内,每份检样另外做一份平行样。同时再作阴性和阳性对照各一份,阳性对照管用 9 mL 青霉素 G 参照溶液,阴性对照管用灭菌脱脂乳 9 mL。所有装有样品的试管置 80 ℃水浴加热 5 min,冷却至 37 ℃以下,加入测试菌液1 mL,轻轻旋转试管混匀。36 ℃±1 ℃水浴培养 2 h,加 4%TTC 水溶液 0.3 mL,在旋涡混匀器上混合 15 s 或振动试管保证液体与样品混匀。36 ℃±1 ℃水浴避光培养 30 min,观察颜色变化。如果颜色没有变化,于水浴中继续避光培养 30 min 作最终观察。观察时要迅速,避免光照过久出现干扰。

判断方法:在白色背景前观察,检样呈乳的原色时,指示乳中有抗生素存在,为阳性结果。检样呈红色为阴性结果。如最终观察现象仍为可疑,建议重新检测。

报告

最终观察时,检样变为红色,报告为抗生素残留阴性。检样依然呈乳的原色,报告为抗生素残留阳性。

本方法检测几种常见抗生素的最低检出限为:青霉素0.004 IU,链霉素 0.5 IU,庆大霉素 0.4 IU,卡那霉素 5 IU。


 

 

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