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乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验



录入时间:2006-6-26 9:06:10 来源:其它

   
   【GB/T 16347—1996】 
乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验 
  1 主题内容与适用范围
  本标准规定了乳酸菌饮料中乳酸菌检验的技术要求。
  本标准适用于以鲜乳、乳粉或辅以大豆等为原料,经乳酸菌发酵加工制成的具有相应风味的活性乳酸菌饮料。
  2 引用标准
  GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂
  3 术语
  乳酸菌:一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸,需氧和兼性厌氧,多数无动力,过氧化氢酶阴性,革兰氏阳性的无芽胞杆菌和球菌。
  乳酸菌菌落总数:检样在一定条件下培养后,所得1mL检样中所含乳酸菌菌落的总数。
  4 设备和材料
  4.1 温箱:36±1℃。
  4.2 冰箱:0~4℃。
  4.3 恒温水浴:46±1℃。
  4.4 电炉:可调式。
  4.5 吸管:容量为1,10和25mL。
  4.6 广口瓶或三角瓶:容量为500mL。
  4.7 平皿:直径为9cm。
  4.8 试管:18×180mm。
  4.9 显微镜。
  5 培养基和试剂
  5.1 改良TJA培养基(改良番茄汁琼脂培养基)。
  5.2 改良MC培养基(Modified Chalmers培养基)。
  5.3 0.1%美兰牛乳培养基。
  5.4 6.5%氯化钠肉汤。
  5.5 pH9.6葡萄糖肉汤。
  5.6 40%胆汁肉汤。
  5.7 淀粉水解培养基。
  5.8 精氨酸水解培养基。
  5.9 乳酸杆菌糖发酵管。
  5.10 七叶苷培养基。
  5.11 革兰氏染色液:按GB 4789.28规定执行。
  5.12 3%过氧化氢溶液:按GB 4789.28规定执行。
  5.13 蛋白胨水、靛基质试剂:按GB 4789.28规定执行。
  5.14 明胶培养基:按GB 4789.28规定执行。
  5.15 硝酸盐培养基、硝酸盐试剂:按GB 4789.28规定执行。
  5.16 生理盐水:定量分装于三角瓶和试剂管内灭菌。
  6 乳酸菌菌落总数的测定  
  6.1 检验程序
  乳酸菌菌落总数检验程序如下:
  (略)
  6.2 操作步骤
  6.2.1 以无菌操作将经过充分摇匀的检样25mL(或25g)放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内作成1∶10的均匀稀释液。
  6.2.2 用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL,沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)。
  6.2.3 另取1mL灭菌吸管,按上述操作顺序,作10倍递增稀释液,如此每递增一次,即换用1支1mL灭菌吸管。
  6.2.4 选择2~3个以上适宜稀释度,分别在作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿。
  6.2.5 稀释液移入平皿后,应及时将冷至50℃的乳酸菌计数培养基(改良TJA或改良MC)注入平皿约15mL,并转动平皿使混合均匀。同时将乳酸菌计数培养基倾入加有1mL稀释液检样用的灭菌生理盐水的灭菌平皿内作空白对照,以上整个操作自培养物加入培养皿开始至接种结束须在20min内完成。
  6.2.6 待琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃温箱内培养72±3h取出,观察乳酸菌菌落特征(见表1),选取菌落数在30~300之间的平板进行计数。计算后,随机挑取5个菌落数进行革兰氏染色,显微镜检查并做过氧化氢酶试验。革兰氏阳性,过氧化氢酶阴性,无芽胞的球菌或杆菌可定为乳酸菌。根据证实为乳酸菌菌落计算出该皿内的乳酸菌数,然后乘其稀释倍数即得每毫升样品中乳酸菌数。例如,检样10-4的稀释液在改良TJA琼脂平板上,生成的可疑菌落为35个,取5个鉴定,证实为乳酸菌的是4个,则1mL检样中乳酸菌数为:
   
  6.3 乳酸菌在改良TJA和改良MC培养基上菌落生长形态特征见表1。
  表1 乳酸菌在不同培养基上菌落特征
  (表略)
  7 乳酸菌的鉴定
  对上述分离到的乳酸菌需进行菌种鉴定时,则作以下试验。
  7.1 菌种制备:自平板上挑取菌落,接种于改良TJA或改良MC琼脂斜面,于36±1℃,24~48h培养,刮取菌苔,分别进行下列试验。
  7.2 乳酸杆菌鉴定试验:极少见还原硝酸盐,不液化明胶,不产生靛基质和硫化氢。
  7.3 常见乳杆菌属内种的碳水化合物反应,见表2。
  7.4 产乳酸的链球菌的鉴别试验,见表3。
  表2 常见乳杆菌属内种的碳水化合物反应
  (表略)
  表3  乳酸的链球菌的鉴别表
  (表略)

 

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