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鲜乳中抗生素残留检验(二)



录入时间:2015-4-10 11:53:17 来源:青岛海博生物

嗜热脂肪芽孢杆菌抑制法

原理:

  培养基预先混合嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢,并含有 pH 指示剂(溴甲酚紫)。加入样品并温浴后,若该样品中不含有抗生素或抗生素的浓度低于检测限,细菌芽孢将在培养基中生长并利用糖产酸,pH 指示剂的紫色变为黄色。相反,如果样品中含有高于检测限的抗生素,则细菌芽孢不会生长,pH 指示剂的颜色保持不变,仍为紫色。

检验程序:

  芽孢悬液:将嗜热脂肪芽孢杆菌菌种划线移种于营养琼脂平板表面,56 ℃培养 24 h 后挑取乳白色半透明圆形特征菌落,在营养琼脂平板上再次划线培养,56 ℃培养24 h 后转入 36 ℃培养 3 d~4 d,镜检芽孢产率达到 95%以上时进行芽孢悬液的制备。每 块平板用 1 mL~3 mL无菌磷酸盐缓冲液洗脱培养基表面的菌苔(如果使用克氏瓶,每瓶使用无菌磷酸盐缓冲液 10 mL~20 mL)。将洗脱液 5 000 r/min离心 15 min。取沉淀物加无菌0.03 mol/L 磷酸盐缓冲液(pH 7.2)制成 10 9 cfu/mL 芽孢悬液,置 80 ℃恒温水浴中 10 min 后,密封防止水分蒸发,置冰箱保存备用。

  测试培养基:在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培养基中加入适量芽孢悬液,混合均匀,使最终的芽孢浓度为 8×10 5 ~2×10 6 cfu/mL。混合芽孢悬液的溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培养基分装小试管,每管 200 μL,密封防止水分蒸发。这样配制好的测试培养基可以在冰箱保存 6 个月。

  培养操作:吸 取样品100 μL加入含有芽孢的测试培养基中,轻 轻旋转试管混匀。每 份检样作二份,另外再作阴性和阳性对照各一份,阳性对照管为 100 μL 青霉素 G 参照溶液,阴性对照管为 100 μL 无抗生素的脱脂乳。于 65℃水浴培养 2.5 h,观察培养基颜色的变化。如果颜色没有变化,须再于水浴中培养 30 min 作最终观察。

  判断方法:在白色背景前从侧面和底部观察小试管内培养基颜色。保持培养基原有的紫色为阳性结果,培养基变成黄色或黄绿色为阴性结果,颜色处于二者之间,为可疑结果。对于可疑结果应继续培养30 min 再进行最终观察。如果培养基颜色仍然处于黄色-紫色之间,表示抗生素浓度接近方法的最低检出限,此时建议重新检测一次。

报告:

最终观察时,培养基依然保持原有的紫色,可以报告为抗生素残留阳性。

培养基变为呈黄色或黄绿色时,可以报告为抗生素残留阴性。

本方法检测几种常见抗生素的最低检出限为:青霉素3 μg/L,链霉素 50 μg/L,庆大霉素 30 μg/L,卡那霉素 50 μg/L。

 

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