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青岛海博瓷珠菌种保存管全面介绍

青岛海博生物
录入时间:2016-7-5 11:04:23 来源:青岛海博生物

    瓷珠菌种保存管是实验室保存菌种的容器,管内有12 颗表面凹孔小瓷珠用于细菌的吸附和 保存,可在保存周期内使用12 次(每次1 个)。菌种保存管使用过程中,将细菌接种在菌种保 存管内,放置于-20℃或-80℃环境中可长期保存(视不同菌种与保存温度,一般可保存3-10 年), 同时菌种保存管的取用和保存较为便利(取用复苏及保存菌株仅需1 分钟)

    由于菌种保存管取用和保存便利,不仅可保存一般细菌,苛刻菌,以及霉菌、酵母菌等真菌 也可在低温条件下通过菌种保存管保存,因此菌种保存管被广泛应用于临床领域(临床药敏试验 菌株的保存)、疾控领域(监测分离到的菌株的保存)、菌种保存中心(菌株的日常取用与保存) 以及制药企业(阳性对照菌株保存和取用)等领域。

产品原理

    细菌在适宜其生长的环境中(培养环境:需氧、厌氧、微需氧,培养温度:35℃或25℃),会在 极短时间内(8-18 小时)经历由调整期-对数期-稳定期-衰退期)四个生长周期(真菌需要培养7 天、酵母菌需要培养三天产生孢子后保存,具体情况需看对数期的时间确定)。菌种保存的最终目的,是能够在以后的时间使用该菌种。要达到这个目的,一般同时结合以下的三方面的措施:

1.取生命力最旺盛的对数期阶段的菌种,该阶段菌种生命力最为顽强,能够更好的耐受保存过程 中温度的变化。

2.通过降低温度,使细菌其进入“休眠状态”,保存过程中该菌种处于最低的代谢活动。

3.降低细菌在降温“休眠过程”和升温“复苏过程”中,温度变化对菌种的伤害。

海博生物菌种保存管的保存原理,为目前较多实验室所常用的甘油保存法的改进方法,可以 简述为“甘油小瓷珠保存法”。

    产品保存时,将菌种刮取或转移至菌种保存管中,上下颠倒保存管,重力作用下,菌种均匀 分布于冻存保护液中。将冻存管中的全部冻存液吸取出菌种保存管。密布凹孔的小瓷珠,扩大了 小瓷珠的表面张力,在表面张力作用下,每个小瓷珠的表面仅仅覆盖着一层冻存保护液,而菌种则存在于这层保护液之中。

    产品使用时,从-20/-40/-80 冰箱中拿出菌种存管,轻轻晃动。由于此时的保存管内已没有 聚集的液体,瓷珠在低温下也会很容易相互分离,而不必像传统甘油法保存时需要很长的甘油融 化时间。随后,用接种针任取一瓷珠,就可直接在平板上划线接种或置于增菌液中培养。 接种完成后,立即将该菌种保存管置于原有的保存环境中,由于此种方法能够快速的取用菌株,因此,菌种保存管内部温度的波动相当的小。因此,能够极大避免保存温度的大幅波动对的菌种的伤害。

注意事项

1、被保存的菌种要求是经过纯化后培养18-24h 内的新鲜菌种(细菌18-24h,酵母菌需3 天, 形成孢子的微生物保存孢子,而放线菌和丝状真菌需培养7 天后保存),不宜使用老化或未经鉴 定的菌种。

2、做厌氧菌保存时,应提供厌氧的环境,如厌氧箱、厌氧袋,菌种保存管中可通入氮气来驱除 保存菌种时所引入的氧气。菌种复苏时,也要创造厌氧的环境。

3、菌种复苏完成后,对使用菌株需要进行再次纯化,以保证菌株的单一性。

4、菌种保存浓度必须要做3-4 麦氏比浊度,如接种浓度过低将会降低复苏效果。

5、待保存于菌种保存管中的菌种完全乳化均匀吸附在多孔小瓷珠后,要将多余的菌种保存液吸 取出来并弃之,否则在复苏时的冻融过程中会损伤菌株活性。

客户问答:

1、为什么说明书上说可在常温下保存一年,资料又说可以长期保存?

答:菌种保存管未使用前,可在常温下保存1 年,使用后,低温保存,使微生物活性保持到最低 代谢活动状态,在-20℃可保存1-3 年,-80℃或液氮保存可保存5-10 年。不同菌种及不同的保 存温度保存时间会有所不同。(例如:大肠、沙门等常规细菌-20℃我们目前可以保存到6 年)

2、 菌种保存管能保存霉菌及酵母菌吗?

答:可以。对于霉菌等真菌需培养7 天进行保存,而酵母菌需培养三天将孢子洗脱下来进行保存, 保存管中的小瓷珠可以作为介质来吸附孢子和菌丝,相当于砂土保存法中砂土做为载体起到的作用。

3、所有的菌都能保存吗?如果不是的话,什么样的菌可以保存?什么样的菌不可以保存?

答:可以。菌种保存的原理是DNA 复制时自发突变导致菌种退化,因此要创造代谢不活泼的状 态,而菌种保存时使菌种进入休眠态(孢子、芽孢),并创造干燥、低温、缺氧、缺营养的环境,创造 的环境越接近此状态,所保存的菌种的时间就越长,所以从原理上讲,所有菌种都可用这种方法保存, 但需要注意的是,由于苛刻菌(如流感嗜血杆菌、脑膜炎萘瑟氏菌)等特殊细菌保存时,需-80℃ 或更低温度保存,才可以做到更长期的保存。

4、我能用菌种保存管永久保存菌株吗?

答:温度越低,保藏效果越好。从目前的试验数据及实际保存效果来看,-20℃可保存1-5 年,-80℃ 或液氮中可保存5-10 年,但需要注意的是所保存的菌种需每年抽检进行生化特征的鉴定,确定菌株无变异。

5、为什么在使用时要将管内的液体尽可能多的吸出?

答:吸出液体可避免反复冻融形成的冰晶对菌株的损伤,加快复苏的过程,因此,要尽可能的将与 菌种混匀后的保存液吸净.而常用的甘油法,在复苏的过程中需用水浴锅快速溶解,在此过程中,对菌株伤害较大。

6、为什么在菌种保存时,要上下颠倒?为什么不能旋摇?

答:上下颠倒,可使菌悬液充分混匀,菌株充分、均匀地吸附到小瓷珠上,旋摇不利于菌悬液充分混匀,反而会使菌株全部沉淀于管底。

7、菌种保存管在使用前需要放置冰箱吗?

答:本公司菌种保存管采用特殊生产工艺,并对产品进行长期留样观察,以及稳定性试验,在使用前可以室温存放1 年,因此在发货过程等过程中室温放置不会影响产品效果。

8、将菌株反复冻存,到底对菌株有什么影响?

答:低温会使菌株细胞内的水分形成冰晶,从而引起细胞结构尤其是细胞膜的损伤。 细胞体积大者一般要比较小者对低温更为敏感,而无细胞壁者则比有细胞壁者敏感。如果放到低温(不是一般冰箱)进行冷冻时,会产生冰晶,冰晶呈针状,极易导致细菌的严重损伤。用电镜观察,可见细菌的核膜上有大量针尖样小孔,当从低温下移出并开始升温时,冰晶又会变大,故反复冻存,会对菌株造成极大损伤。

9、在使用后,菌种保存管的保存环境?需要-80℃冰箱吗?

答:本公司菌种保存管采用的是低温冷冻保存法,因此,使用后,需放置低温环境,如-20℃、-80℃或液氮中保存,而且温度越低,保存效果越好。用户需根据菌种的保存要求选择具体保存温度。

10、为什么在取用菌株时,操作过程要求快速?

答:菌种保存复苏的原则,要求慢冻快融,之所以要求快速,是因为在菌种复苏的过程中, 长时间的 溶解过程会对所保存的菌种造成损伤,而YOCON 经过改良的保存方法最大程度的避免复苏所造 成的影响,但我们还是建议遵循菌种的保存复苏原则,保证所复苏菌种的复苏率。

11、为什么有时候菌种的保存效果不佳?

答:1、可能是由于保存后未将保存液吸尽,反复冻融形成冰晶损伤菌株细胞,影响了菌株活性。

2、确定所保存的菌种是否为对数生长期的菌种,我们建议普通菌种保存为18 小时内的新鲜菌种,而霉菌和酵母菌需要保存其对数生长期阶段的菌种。

12、菌种保藏时为什么要进行分离纯化?

答:分离纯化后才能获得单一菌株,单一菌株进行菌种保藏才有意义,防止菌种交叉污染和变异,这也是菌种保存的基本原则。

13、该产品能否用于菌种的运送,如果可以在什么条件下运送?

答:就目前试验数据而言,我们只建议用于普通细菌的短期运送,对于苛刻菌及厌氧菌不能用此方法,并且在运送期间保存液不得吸出,2-8℃运送不超过5 天 ,运送到客户手中,需重新纯化。另外需要说明的是如弧菌属的菌种需要常温运送,其对2-8℃温度及其敏感。

14、菌种保存管对于平板来说,对挑选菌落个数有要求吗?还是将整个平板的菌落全部刮入管中?

答:对于要保存的细菌一般是要进行2-3 次的纯化,要保证一个平板上的菌是由单一菌落传代而来的,所以在细菌保存的过程中,为了保证制备的菌悬液可以达到3-4MCF,是可以将整个平板的的细菌全部刮到管中的,如果平板长的比较满一般半个平板就够用,具体用量也根据菌种的不同有所差异,如霉菌、酵母菌在保存时,不适合用浊度法。

15、对于液体培养基培养的纯菌,是否也可以用咱们的菌种保存管?如果可以的话, 怎么操作?

答:是可以用的,如果液体培养基能保证是纯菌的话,可以直接离心,弃掉上清,然后把保存管中液体吸进去充分混匀,然后再转移到菌种保存管中,整个过程要注意无菌操作。不过,一般菌种保存管最好选择平板菌落进行保存,因为液体培养基中有杂菌是不易观察出来的。

16、为什么我保存在平板上的菌每隔一段时间就得重新传一次,即使是放在温度为2-8 度的冰箱中?

答:在2-8℃保存的菌种,并不是出于低代谢率的环境,所以此环境下保存的菌种极易变异,故一般一个月重新传代一次,确定菌种有无变异,并且连续传5 代后的菌种不能使用。

17、为什么说,如果有条件的话,菌种保存管最好置于-80 冰箱或液氮中?

答:因为,贮存在-70℃以下低温中能减少冰晶形成,可极大降低冰晶形成对细菌的伤害,同时可为被保存的菌种创造更低的代谢环境,从而延长细菌保存的时间。

另附链接:

1 瓷珠菌种保存管- 产品详情- 青岛海博生物

http://www.hopebiol.com/asphtml/product2243.htm

2 瓷珠菌种保存管视频- 菌种保存与复苏

http://www.hopebiol.com/video/junzhongbaocun.asp


 

 

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