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Voges-Proskauer(V-P)试验的原理

许英俊
录入时间:2018-1-11 9:57:34 来源:青岛海博生物

一、试验原理:

    细菌在葡萄糖代谢中生成丙酮酸,从丙酮酸开始,随细菌种类不同而有多种分解途径,有的使丙酮酸进一步分解,生成甲酸、乙酸、乳酸等终产物,有的可以使丙酮酸脱羧变为中性最终产物乙酰甲基甲醇(Acetylmethyl carbinol),亦称3-羧基丁酮(Acetoin)。本试验即为检查某些细菌在葡萄糖代谢中是否产生乙酰甲基甲醇,作为鉴定依据。

    乙酰甲基甲醇在碱性环境中可被空气中的氧气氧化为丁二酮(Diacetyl),丁二酮与蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用,生成红色化合物,即为V-P试验阳性。

肌酸或肌酸酐可供给比精氨酸更多的胍基,故有加快V-P试验出现阳性反应的作用。

    不加α-萘酚,至少要有10PPm的丁二酮才能出现阳性,加入α-萘酚可使V-P试验的灵敏度提高约50倍而不降低试验的特异性,其酒精液还有增强颜色的作用。在试验中,必须先加入α-萘酚,使其先与丁二酮和胍基复合物结合,然后才能加入40%氢氧化钾溶液,加入量不得超过0.2ml。若加入次序颠倒,氢氧化钾可与蛋白胨某些成分反应产生橙红色而造成假阳性。氢氧化钾作为氧化剂可加速乙酰甲基甲醇氧化为丁二酮,并有助于二氧化碳的吸收。

二、试验结果判断:


三、注意事项:

    牛肉浸汤不能用于本试验,因在肌肉浸出物中含有乙酰甲基甲醇、丁二酮以及其它干扰试验的物质,可造成假阳性。

    V-P试验阳性菌偶尔也会不出现阳性反应,为避免这种情况,可将加有试剂的培养物于50℃左右轻微加热,阳性菌即出现红色,而真正阴性菌仍保持原色。

    在通用培养基中,一般培养1-3天多数能出现阳性反应,培养时间过长,可因产酸而使V-P反应减弱或造成假阴性。

    一般来说,V-P试验和甲基红试验多呈相反结果。但应注意,这也不是绝对的,有少数细菌如蜂房哈夫尼亚菌(Hafnia alvei)和奇异变形杆菌有时两试验均出现阳性反应。

本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。在用于芽孢杆菌和葡萄球菌等其它细菌时,通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基甲醇的产生,故应省去或以氯化钠代替。

    关于V-P试验培养物的培养温度,一般多采用35℃或37℃,但日本有学者认为37℃培养常使分解乙酰甲基甲醇的酶失去活性,故主张采用28-30℃培养,夏季可培养于室温。已知有少数细菌,如哈夫尼亚肠杆菌,在37℃培养的V-P试验结果常不稳定,需在25-30℃培养,才能获得可靠结果。


 

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