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GN增菌液的原理及使用注意事项

许英俊
录入时间:2018-4-26 14:41:05 来源:青岛海博生物

一、培养基用途及试验原理:

GN增菌液(简称GN肉汤,Gram Negative Bacteria Broth,即革兰氏阴性菌肉汤)用于革兰氏阴性菌的选择性培养,特别是志贺氏菌和沙门氏菌的增菌培养

该培养基中胰蛋白胨提供碳源、氮源、维生素和矿物质葡萄糖和甘露醇提供糖类柠檬酸钠和去氧胆酸钠抑制革兰氏阳性细菌,特别是粪链球菌和各种需氧及厌氧芽孢杆菌,由于去氧胆酸钠浓度低,对大肠菌的抑制力较弱,不影响沙门氏菌和志贺氏菌的生长磷酸二氢钾和磷酸氢二钾是缓冲剂,可缓冲因标本或细菌发酵糖的酸化作用,可使培养基PH稳定;氯化钠维持均衡的渗透压;甘露醇比葡萄糖量多,这对变形杆菌的生长有所限制,而对沙门氏菌和志贺氏菌却很有利,因为后两者都能利用甘露醇。所以说GN增菌培养基是为从含有超量杂菌的标本中分离沙门氏菌或志贺氏菌而设计的。

二、培养基的使用方法

1、称取本品39g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装三角瓶,每瓶225mL115℃高压灭菌15min

2、称取检样25g,加入装有225mLGN增菌液的500mL瓶内,固体食品用均质器以8000—10000r/min,或用乳钵加灭菌砂磨碎,粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化

3、于36±1℃培养6—8h。培养时间视细菌生长情况而定,当培养液出现轻微混浊时即应中止培养

4观察结果。

三、试验结果判断:

配成的培养基应呈淡黄色透明液体,以下菌株接种此培养基后,经36±1培养6-8h的生长情况如下:

菌名

菌号

接入菌数

生长状况

鼠伤寒沙门氏菌

ATCC14028

10-100

良好

福氏志贺氏菌

CMCC(B)51572

10-100

良好

金黄色葡萄球菌

ATCC25923

1000-5000

不生长

粪肠球菌

ATCC29212

1000-5000

不生长或生长差

 

各质控菌株在GN增菌液中的培养结果

四、注意事项:

此培养基接种后,培养1-2小时即有浑浊现象,故经6h增菌后应立即转接至分离平板。因为大肠菌群、绿脓假单胞菌及变形杆菌,在最初的6h生长较缓慢,而志贺氏菌和沙门氏菌可相对大量增殖。

有资料显示,超过6h后,随着培养时间的延长,繁殖的菌数目的增加,培养基的抑制作用也会逐步减弱,从而导致有较强抵抗力的金黄色葡萄球菌生长良好。这组资料,再次表明严格控制增菌时间对该培养基使用的重要性,在使用过程中必须严格遵守。

 

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