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MH琼脂的原理和使用方法

张辉
录入时间:2018-6-14 8:33:44 来源:青岛海博生物

一、试验原理:

本培养基主要用于用于琼脂纸片扩散法(kirby-baner纸片扩散法)测定细菌对抗生素敏感性。 牛肉粉和酸水解酪蛋白提供氮源、维生素和氨基酸;可溶性淀粉吸收有毒的代谢产物;琼脂是培养基的凝固剂。

二、培养基配方g/L):

牛肉粉

6.0

可溶性淀粉

1.5

酸水解酪蛋白

17.5

琼脂

17.0

pH 7.3±0.1    25

三、试验方法:

1. 平板的制备与保存

称取Mueller-Hinton琼脂42.0g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装三角瓶,121高压灭菌15min,倾注培养基到无菌平皿中,使之在平皿中形成一个厚度为4-5 mm的琼脂层。倾注后将平板放到水平平面,使琼脂冷却凝固。凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和(或)5 ±3 ℃冰箱的密封袋中,在有效期内使用。使用前应可将平板置35 ℃温箱中或置室温层流橱中对琼脂表面进行干燥,培养基表面应湿润,但不能有水滴,培养皿也不应有水滴。 

2. 质控菌株的复苏 

将质控菌株接种到TSA平板上,按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。检查纯度合格后,用于质控工作菌悬液的制备。 

3. 质控菌工作菌悬液的制备

将纯度满意的质控菌株培养物悬浮于TSB肉汤中,并调整浊度为0.5麦氏标准(约1×108 CFU/mL2×108 CFU/mL)。 

4. 接种 

用涂布法将质控工作菌悬液接种于MH平板上,并贴上相应的抗生素纸片(每平板最多贴6片),将平板翻转后按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。调整菌悬液浊度与接种所有平板间的时间间隔不要超过15 min 

四、结果观察与解释 

接种以下质控菌株,放置36±1℃需氧培养18-24小时。在无反射黑色背景下,观察有无抑菌环。

MH琼脂质控参考标准

抗生素名称

纸片抗生素

(mg)

抑菌圈(mm

大肠埃希菌

ATCC 25922

铜绿假单胞菌

ATCC 27853

金黄色葡萄球菌

ATCC 25923

粪肠球菌

ATCC 29212

庆大霉素

10

19-26

16-21

19-27

羟苄青霉素

100

23-29

18-24

-

四环素

30

18-25

-

24-30

多黏菌素B

300IU

12-16

11-16

-

氯霉素

30

21-27

-

19-26

TMP-SMZ

1.25/23.75

24-32

-

24-32

≥20

头孢哌酮

75

28-34

23-29

24-33

 

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