有机酸测定：挥发性有机酸，将待检菌株的测定结果与标准溶液结果比较，根据各组分峰的保留时间以决定各峰的组分，并根据各组分峰的积分面积计算其浓度，参阅VPI厌氧菌实验室手册分析标准菌株图谱进一步识别。

乙醇氧化：在上述培养基中加入碳酸钙(1%)和琼脂，乙醇浓度为2%，不加指示剂，可用于醋酸细菌的分离和鉴定。在平板培养条件下于3,7,14天观察菌落四周有透明圈者为阳性，否则为阴性。有的细菌，如醋酸细菌，培养初期产酸溶解碳酸钙，形成透明圈，但所形成的乙酸钙又进一步被氧化分解，转化成碳酸钙，使菌落四周呈不透明的乳白色，并有彩色光泽。

牛奶分解：脱脂牛奶的制备：新鲜牛奶用离心机分离，除去上层奶油，取下层脱脂牛奶。若无新鲜牛奶可用脱脂奶粉代替，100g脱脂奶粉溶于1000ml水中，或将鲜奶煮沸，在冷凉处静置24h,用虹吸法取出底层牛奶。

硫化氢的测定： pH 7.0～7.4.分装试管，每管液层高度4～5 cm,112℃灭菌20～30 min。另外将普通滤纸剪成0.5～1cm宽的纸条，长度根据试管与培养基高度而定。用5%～10％的醋酸铅将纸条浸透，然后用烘箱烘干，放于培养皿中灭菌备用。

明胶液化：pH7.2-7.4,分装试管，培养基高度约4～5cm，间歇灭菌或115℃蒸气灭菌20min，取18～24h的斜面培养物穿刺接种，并有两支未接种的空白对照。

水解马尿酸：适用于链球菌(Streptococcus)、弯曲杆菌(Campylobacter)和阴道加德纳氏菌(Gardnerella uzginalis)。本文节选自《常见细菌系统鉴定手册》第十四章。

色氨酸脱氨酶的测定方法：加酚红至微橙的黄色(25-30mg), pH约为6.8-6.9,分装于三角瓶中，121℃蒸气灭菌20min。另将20g尿素溶于100ml水中，过滤灭菌，用无菌操作与上述热灭菌的培养基相混，并分装于无菌试管内，每管液层高约3～4cm。

脲酶的测定方法介绍：将测定菌接在营养琼脂斜面上，在第3天和第7天进行脲酶的测定。方法是：在空试管中，将斜面菌苔做成2ml浓菌悬液，加入一滴酚红指示剂，调pH到7,即酚红刚刚转黄呈橙红色，再将此菌悬液分作两份，在其中的一管加入少许结晶的尿素约0.05-0.1g,另一管不加尿素作为对照。

硝酸盐还原：还原硝酸盐反应是在较为厌氧条件下进行的，虽不必用矿油封液面，但分装试管时液层不宜太薄，对生长缓慢的细菌尤应注意。

纤维素分解测定纤维素水解有两种做法。一种是将基础培养基分装试管，在培养基中浸泡一条优质滤纸，如新华一号滤纸。纸条宽度以易于放入试管为宜。纸条长度约5- 7cm。测定好氧菌时，应有部分纸条露于培养基液面外，测定厌氧菌时，纸条应全浸泡于培养基中。接种培养基，应有不接种的空白对照。

糖、醇类发酵以幼龄斜面培养物穿刺接种于上述培养基，适温培养，1,3,5天后观察，如指示剂变黄，表示产酸，为阳性；不变或变蓝（紫）则为阴性。

葡萄糖的氧化发酵：本实验可同时观察细菌的运动性，观察运动性时琼脂软硬必须合适，我们所用的琼脂（海燕牌琼脂条）以0.5%-0.6％为宜，其他牌号的琼脂则须经实验决定使用浓度。琼脂的浓度以放倒试管不流动，轻轻敲打则琼脂柱破碎为宜。

氧化酶的生化特征鉴定：二甲基对苯撑二胺溶液易于氧化，一般可于冰箱中贮存二周。如溶液颜色转红褐色，则不宜使用。     （2）铁、镁等金属可催化二甲基对苯撑二胺呈红色，故不宜用电炉丝或铁丝等取菌苔。如无白金丝，可用玻棒或灭菌牙签取菌苔涂（3）在滤纸上滴加试液以刚刚湿润为宜。如滤纸过湿，妨碍空气与菌苔接触，则延长显色时间，造成假阴性。

细菌特征的鉴定方法：平板制作将15～20 ml融化的营养琼脂培养基冷却至50℃左右，按无菌操作倒人直径9 cm的培养皿内。如有冷凝水，倒置于30～37℃温箱内，使之干燥以便于单菌落的出现

显微镜观察方法:插片法 适用于观察放线菌的自然生长状态,盖片法 ,用适合菌种生长的固体培养基倒平板，涂布接种上需观察的菌株，然后用无菌小刀在平板正中间切去1cm左右的琼脂块

抗酸染色方法：镜检时抗酸性细菌菌体呈红色，即抗酸染色阳性，非抗酸性细菌性呈蓝色。

细胞壁的染色方法：鞣酸结晶紫法，磷钼酸法

荚膜的染色方法：荚膜的产生与培养基有关，所以应选用合适的培养基。在报告结果时应注明所用的培养基。     （2）有些动物致病菌仅在动物体内生长时形成荚膜，而在培养基中培养时不形成荚    不同的种，产生荚膜的时间不尽相同，必要时可在不同时间观察。

特殊的芽孢染色法简介芽孢通常可在革兰氏染色片中看到，但在不易清晰观察时，可用特殊的芽孢染色法，使芽孢与菌体分别呈现不同颜色，便于观察。

判定试验菌是否有运动性的方法根据有鞭毛的细菌可以在半固体培养基中游动却又不能任意游走的现象，观察细菌生长情况，判定试验菌是否有运动性。可使用试验菌能良好生长的培养基，在其中加0.3%～0.6％的琼脂，（所用的琼脂量可因牌号不同而异）一般半固体培养基应是放倒试管不流动，而在手上轻轻敲打时琼脂即破裂为宜。

鞭毛染色方法的简介：染液最好当日配制，次日使用效果差，染出的鞭毛色浅，一般第三日不能再使用此液。此法染鞭毛适于染较多的菌株。一定要充分洗净甲液后再加乙液，否则背景很脏。

革兰氏染色：所观察的细胞一般为24h的培养物。染色结果可疑时，以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，以大肠埃希氏菌为阴性对照菌。

实验用品的灭菌方法简介：微生物实验室常用的培养皿、三角瓶、吸管、试管、过滤器必须彻底灭菌，否则会影响实验结果。

斯特氏蒲属、惧硫球菌属和火叶菌属的特征简介斯特氏蒲属、惧硫球菌属和火叶菌属属于极端嗜热和超嗜热代谢元素硫的古菌中的第Ⅲ亚群。

栖高温菌属、热圆菌属和气热菌属的特征简介：栖高温菌属、热圆菌属和气热菌属属于极端嗜热和超嗜热代谢元素硫的古菌中的第Ⅲ亚群。

葡萄嗜热菌属、硫还原球菌属和热网菌属的特征简介：葡萄嗜热菌属、硫还原球菌属和热网菌属属于极端嗜热和超嗜热代谢元素硫的古菌中的第Ⅲ亚群。