SN 0170—92
出口食品沙门氏菌属 (包括亚利桑那菌)检验方法
中华人民共和国进出口商品检验行业标准
出口食品沙门氏菌属 SN 0170—92
(包括亚利桑那菌)检验方法 代替ZB 8—83
Method for detection of Salmonellae (including Arizona) in food for
export
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1 主题内容与适用范围
本标准规定了冻猪肉、冻鸡肉、鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)的检验方法。 本标准适用于冻猪肉、冻鸡肉、鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验。其他食品可参照使用。
2 样品制备及增菌培养
2.1 肉类
2.1.1 如为冷冻产品,应在45℃以下不超过15
min,或在2～5℃不超过18h解冻。若不能及时检验,应置于—15℃左右保存。非冷冻而易腐的食品,置于4℃冰箱保存。
2.1.2 以无菌操作,称取剪碎后的瘦肉样品25 g,置于灭菌均质杯内,加入25 mL,缓冲胨水增菌液,以8000～10000r/min均质1min,移入盛有200 mL缓冲胨水增菌液的500mL广口瓶内,混合均匀,如pH低于6.6,用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液,调pH至6.8±0.2,于37℃水浴培养4h(以增菌液达到37℃时算起),进行前增菌；其后,移取10mL转种于盛有100mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的250mL玻璃瓶内,摇匀,于42±1℃培养20±2h,进行选择性增菌。必要时,同时另称取25g剪碎的瘦肉样品,加入25mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液,同样进行均质。其后,移入盛有200mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液的500mL广口瓶内,混合均匀,如pH低于6.6, 用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液调pH至6.8±0.2,于37℃培养24±2 h,进行直接选择性增菌。
2.2 蛋品
2.2.1 冰蛋品(冰鸡全蛋、冰鸡蛋白、冰鸡蛋黄)
2.2.1.1 按2.1.1解冻和保存样品。
2.2.1.2 以无菌操作称取样品25 g,型于盛有225mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的500mL广口瓶内,混合均匀,如pH低于6.6,用灭菌1 mol/L氢氧化钠溶液调pH至6.8±0.2,于37℃培养24±2h,进行直接选择性增菌。 2.2.2 干蛋品(鸡全蛋粉、鸡蛋白片、鸡蛋白粉、鸡蛋黄粉)
以无菌操作将样品碾碎后,称取25g加入盛有225mL缓冲胨水增菌液的500mL广口瓶内(瓶内事先盛有直径3～4mm的玻璃珠约50粒),振荡10min,如pH低于6.6,用灭菌1mol/L 氢氧化钠溶液调pH至6.8±０.2,于37℃培养20～24h,进行前增菌；其后,移取10 mL转种于盛有100mL 亚硒酸盐胱氨酸增菌液的250
mL玻璃瓶内,混匀,于42±1℃培养20±2h,进行选择性增菌。
3 分离培养
3.1 将增菌培养液摇匀,以无菌操作,用直径3mm的接种环分别挑取1环,分别划线于表面无凝结水的亚硫酸铋和胆硫乳琼脂平板各一个(必要时亚利桑那菌琼脂平板可参照使用),
于37℃培养24±2h。
3.2 观察各琼脂平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落,如无典型或可疑菌落,应再继续培养24±2h。 沙门氏菌属的菌落特征见表1。
表1 沙门氏菌属菌落特征
琼脂平板 菌 落 特 征
沙 门 氏 菌 亚 利 桑 那 菌
亚硫酸铋琼脂 棕褐色或灰色至黑色,有时有金属光泽,周围培养基呈棕色或黑色,有些菌株呈灰绿色,周围培养基不变或微变暗 黑色,周围培养基一般不变黑或微变黑。有些菌株呈灰绿色,带黑心或不带黑心
胆硫乳琼脂 无色半透明有黑色中心或几乎全为黑色。有些菌株无色半透明 乳糖阴性菌株,相似于沙门氏菌菌落,乳糖阳性菌株为粉红色有暗色中心
亚利桑那菌琼脂 黄色有暗蓝色中心,周围培养基中有黄色沉淀物 粉红色有黑色中心,有时为全黑色周围培养基呈红色,被发酵卫矛醇或庶糖的细菌包围时,菌落边缘可为浅黄色
4 鉴定
4.1 筛选试验
4.1.1 每个琼脂平板至少应挑选2个典型或可疑菌落,分别用接种针接种赖氨酸脱羧酶培养基或尿素酶琼脂一管,接种后无须灭菌接种针,直接再接种三糖铁琼脂一管于37℃培养24±2h。
4.1.2 挑取菌落后的琼脂平板,应置于4～8℃至少保留24 h,以备必要时复查。
4.1.3 按表2或表3结果进行判断。
表2 三糖铁琼脂和赖氨酸脱羟酶培养基筛选
三 糖 铁 琼 脂 赖氨酸脱羧酶培养基 初步判断
斜 面 底 层 产 气 硫化氢
K A ＋(－) ＋(－) + 可疑沙门氏菌属
K A ＋(－) ＋(－) - 可疑沙门氏菌属
A A ＋(－) ＋(－) + 可疑亚利桑那菌
A A ＋(－) ＋(－) - 非沙门氏菌属
K K +/- +/- +/- 非沙门氏菌属
注: K—产碱; ＋—阳性反应; (－)—少见反应；A—产酸; －—阴性反应; ＋/－─阳性或阴性反应。
表3 三糖铁琼脂和尿素酶琼脂筛选
三 糖 铁 琼 脂 尿素酶琼脂 初步判断
斜 面 底 层 产 气 硫化氢
K A ＋(－) ＋(－) - 可疑沙门氏菌属
A A ＋(－) ＋(－) - 可疑亚利桑那菌
K A ＋(－) ＋(－) + 非沙门氏菌属
A A ＋(－) ＋(－) + 非沙门氏菌属
K K +/- +/- +/- 非沙门氏菌属
注: K—产碱; ＋—阳性反应; (－)—少见反应；A—产酸; －—阴性反应;
＋/－─阳性或阴性反应。
4.2 生化试验
4.2.1 将符合表2或表3可疑沙门氏菌属特性的三糖铁琼脂培养物,按表4进行生化试验
(表中赖氨酸脱羧酶试验或尿素酶试验的结果见4.1结果,不再另做)。
表4 沙门氏菌属生化反应
序 号 生 化 项 目 反 应
沙门氏菌 亚利桑那菌
1 尿素酶试验 - -
2 V-P试验 - -
3 氰化钾试验 - -
4 赖氨酸脱羧酶试验 + +
5 吲哚试验 - -
6 丙二酸钠试验 - +
7 卫矛醇试验 d -
注: ＋—阳性反应；－—阴性反应；d—反应不定。
4.2.2 所有生化试验管均于37℃培养24±2 h。
4.2.3 生化试验结果符合表4沙门氏菌属特性的按4.3进行。
4.3 血清学试验
4.3.1 检查培养物有无自凝性
在洁净的玻片上加一滴生理盐水,将待试培养物混合于生理盐水滴内,使成为均一性的混浊悬液,将玻片轻轻摇动30～60 s,在黑色背景下观察反应(最好用放大镜观察)。如菌体彼此相凝集成明显或比较明显小颗粒状物,即认为有自凝性。反之无自凝性。
4.3.2 检查“O”抗原
对无自凝性的培养物,按照4.3.1的程序进行试验,但以多价“O”血清代替生理盐水, 在2min内判断结果。如为阳性结果以单价“O”血清进行分群试验。如为阴性结果,必要时,可结合4.2结果按4.3.3进行试验,再以多价和单价“O”血清进行试验。
4.3.3 检查“Vi”抗原
按照4.3.1的程序进行,但以“Vi”血清代替生理盐水。
4.4 根据4.2和4.3试验结果,按照表5进行判定。
表5 沙门氏菌属生化试验与血清学试验结果判定
类别 生 化 试 验 血清学试验 其他试验 判 定
1 符合表4中沙门氏菌生化特性 "O"因子血清分群阳性 沙门氏菌
2 符合表4中沙门氏菌生化特性 "O"因子血清分群阴性 菌落典型,镜检革蓝氏阴性无芽胞杆菌 沙门氏菌
3 尿素酶试验阳性 非沙门氏菌
4 尿素酶试验阴性,表4生化反应3～5项中任一项不符合沙门氏菌特性 "O"因子血清分群阳性 沙门氏菌
5 尿素酶试验阴性,表4生化反应2～5项中任一项不符合沙门氏菌特性 "O"因子血清分群阴性 非沙门氏菌
6 尿素酶试验阴性,表4生化反应2～5项中任二项或二项以上不符合沙门氏菌特性 非沙门氏菌
7 符合表4中亚利桑那菌生化特性 "O"因子血清分群阳性 亚利桑那菌
8 符合表4中亚利桑那菌生化特性 "O"因子血清分群阴性 菌落典型,镜检革蓝氏阴性无芽胞杆菌 亚利桑那菌
9 尿素酶试验阳性 非亚利桑那菌
10 尿素酶试验阴性,表4生化反应3～5项中任一项不符合亚利桑那菌特性 "O"因子血清分群阳性 亚利桑那菌
11 尿素酶试验阴性,表4生化反应2～5项中任一项不符合亚利桑那菌特性 "O"因子血清分群阴性 非亚利桑那菌
12 尿素酶试验阴性,表4生化反应2～5项中任两项或两项以上不符合亚利桑那菌特性 亚利桑那菌
注:①丙二酸钠试验阴性,卫矛醇试验反应不定的菌株,按上述1～6类别结果进行判断。
②丙二酸钠试验阳性,卫矛醇试验阴性的菌株,按上述7～12类别结果进行判断。
③如以上生化项目仍不能判定时,可按P·R·爱德华,W·H·爱文:《肠杆菌科的鉴 定》(1978中译本),扩大必要的生化试验。结合血清学作综合判定。
5 报告结果
5.1 报告阳性结果:“发现沙门氏菌”或“发现亚利桑那菌”或“发现沙门氏菌和亚利桑那菌”。
5.2 报告阴性结果:“未发现沙门氏菌”或“未发现亚利桑那菌”或“未发现沙门氏菌和亚利桑那菌”。
