成份(g/L)
特殊营养物质 |
21.4 |
显色剂 |
0.2 |
琼脂 |
12.0 |
pH 6.8±0.2 25℃ |
此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。
注意:
此培养基仅供实验室使用。
用法
称取本品 33.6 g 加入1000ml蒸馏水，加热溶解并不停搅拌，煮沸不要超过1分钟。分装三角瓶，121℃高压灭菌15分钟。取1ml制备好的样品液加入直径为9cm无菌平皿中心，倾入冷却至45-50℃培养基约15ml，混匀，凝固后，36±1℃倒置培养18～24h。
或冷却至45-50℃时，倾入无菌平皿，琼脂完全凝固后，在37℃的培养箱中倒置放置1-2小时，加入适当稀释度的样品液1ml，涂布于培养基上，36±1℃培养18～24h。
贮存
制备好的平板应立即使用，应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处， 保存温度2-8℃，注意避光保存。
失效
干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
操作步骤
1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液
2、取样品液1ml加入冷却至45-50℃显色培养基中混匀或涂布于平板上
3、36±1℃培养18～24h，选用有30～200个菌落的平板，计数平板上出现的典型大肠杆菌菌落。大肠杆菌典型菌落为蓝绿色，其它细菌为无色或黄色菌落。
总大肠杆菌=蓝绿色菌落
4、对可疑大肠杆菌菌落可划线接种到营养琼脂平板上，36±1℃培养12-16小时，挑取单菌落做大肠杆菌全套生化试验(本公司有生化鉴定管套装20支x3种)
质量控制
1、外观
此干燥培养基的粉末均匀，具有良好的流动性，呈乳白色。制备好的平板呈透明无色固体培养基。
2、微生物试验
在36±1℃培养18～24h小时：
质控菌株 |
ATCC |
生长情况 |
菌落颜色 |
单增李氏菌 |
27853 |
-/+ |
无色 |
金黄色葡萄球菌 |
25923 |
-/+ |
无色 |
大肠杆菌 |
25922 |
+++ |
蓝色 |
沙门氏菌 |
|
+++ |
无色 |
大肠菌群 |
|
+++ |
无色 |
方法的局限性
本培养基鉴定大肠杆菌，少数情况下可能会出现假阳性，但不会出现假阴性，有时可能需做其它补充试验。
典型特征
大肠杆菌典型菌落为蓝绿色，大肠菌群为无色菌落，其它细菌为无色或黄色菌落。
参考文献
- FRAMPTON, E.W., RESTAINO, L. a. BLASZKO, L.: Evaluation of -glucuronidase substrate in a 24 hour direct plating method for Escherichia coli. – J. Food Protection, 51; 402-404 (1988).
- KILIAN, M. a. BüLOW, P.: Rapid diagnosis of Enterobacteriaceae. I. Detection of bacterial glycosidases. – Acta Pathol. Microbiol. Scand. Sect. B 84; 245-251 (1976).
- LE MINOR, L. a. HAMIDA, F. BEN: Advantages de la recherche de la –galactosidase sur celle de la fermentation du lactose en milieu complexe dans le diagnostic bactériologique, en particulier des Enterobacteriaceae. – Ann. Inst. Pasteur (Paris), 102; 267-277 (1962).
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