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甲苯胺蓝-DNA酶琼脂的简单介绍

张文慧
录入时间:2021-1-8 10:36:50 来源:青岛海博生物

一、培养基用途


 用于金黄色葡萄球菌耐热核酸酶的检测。金黄色葡萄球菌是引起人、畜患病的常见的病原体之一,同时也是食品等检验标准的重要监测病原体之一。而耐热核酸酶是产肠毒素金黄色葡萄球菌生长的一个典型特征,是检测金黄色葡萄球菌污染的标志特征之一。


二、培养基成分及使用方法


 1、培养基成分

成分

含量(g/1000mL)

脱氧核糖核酸(DNA)

0.3

氯化钙

1.1

氯化钠

10.0

三羟甲基氨基甲烷(Tris)

6.1

琼脂

10.0

pH 9.0±0.1

25℃


 2.使用方法


 称取本品27.58g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,煮沸溶解后冷却至合适温度,倾入无菌平板。


三、实验原理


 产肠毒素的金黄色葡萄球菌可产生胞外热稳定DNA酶,在沸水中水浴15min后仍可保持活性,水解DNA长链形成数个单核苷酸组成的寡核苷酸链,使甲苯胺蓝由蓝色变成粉红色;氯化钙提供阳离子作为激活剂;氯化钠维持均衡的渗透压;三羟甲基氨基甲烷为缓冲剂;琼脂为培养基的凝固剂。


四、实验方法及结果


 1、按使用方法制备培养基,在琼脂上打成直径2mm的小孔,抽出小孔中的琼脂。


 2、每个小孔加入约0.01ml水浴处理(在水浴中煮沸15min)后的可疑菌的肉汤培养物。


 3、将平板正置于培养箱中,36℃±0.1培养4小时。阳性反应为在小孔周围形成至少扩展约1mm的粉红色的晕圈。


 4、金黄色葡萄球菌有粉红色晕圈,如图1-a、1-b所示;大肠埃希氏菌无粉红色晕圈,如图1-c所示。




a:金黄色葡萄球菌ATCC6538,b:金黄色葡萄球菌ATCC25923,c:大肠埃希氏菌ATCC25922

图1 甲苯胺蓝-DNA琼脂的微生物结果


五、注意事项


 1、配置培养基时,如不能立即使用可分装三角瓶,121℃高压灭菌15min,灭菌后的培养基可于室温存放4个月无变化。使用时加热融化倾注平板,此培养基经数次融化后仍可使用。


 2、每个平板打孔数量可根据实际情况增减,但需预留出晕圈范围,以防打孔位置过近影响阴阳性判断。 


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 注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。             

 

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