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生化鉴定条使用注意事项及讨论

许英俊
录入时间:2022-11-17 16:31:27 来源:青岛海博生物

  生化鉴定条作为成套生化管的升级产品,以其快速、简单、操作方便的优势,受到广大用户的好评。我公司目前有各种生化鉴定条出售,满足不同客户的需求(产品目录和信息参考:HBI微生物生化鉴定条 )。但在实际使用过程中,经常会碰到一些疑问或问题,本文将对有关问题进行解释和讨论。


1、做生化鉴定前一定要进行纯化吗?

  对单一菌种进行鉴定,不需要进行纯化操作,只需要保证菌体新鲜就行。但对于在选择性培养基上分离出的菌,最好进行纯化后在进行鉴定。原因如下:

  (1)选择性培养基上初步分离的菌落,不一定是单一菌种形成的,若有其它菌种,会干扰试验结果,造成误判;

  (2)选择性培养基成分复杂,挑菌时若沾取了少量培养基,有可能会对鉴定结果造成干扰;

  (3)选择性培养基中通常含有一些抑制成分,平板上长出的菌落会受到不同程度的抑制或损伤,活力不好,不利于生化结果的观察和判定;

  (4)选择些平板上长出的菌落通常较小,若需要做很多生化试验,有可能出现菌体不够用的情况(通常每挑一下接种后,要进行烧环灭菌再进行下一次挑菌,浪费较多)。

  上面两种情况,无论是为了得到新鲜菌体,还是为了得到较纯的菌落,都需要在营养琼脂平板上进行划线培养。所以这是菌种生化鉴定前首先要做的准备工作,直接使用初筛菌,试验结果可能会有一些差异,造成误判(如图1)。

使用纯化菌(左)和初筛菌(右)接种鉴定条培养结果的差异

图1 使用纯化菌(左)和初筛菌(右)接种鉴定条培养结果的差异


2、接种鉴定条时,一定要用菌悬液来接种吗?

  鉴定条说明书中要求“取一内盛2mL无菌水或无菌生理盐水试管,用接种针挑取纯化菌落至无菌水中仔细研磨制成0.5麦氏浊度的均一细菌悬液,每孔滴入100mL菌悬液,其中固体和半固体生化管采用穿剌接种(参考:HBI微生物生化鉴定条 )”。也就是说要用均匀的菌悬液进行接种。这样要求,是为了尽量使每个孔中接入的菌量相当,使各生化反应趋于同步。如果使用接种针或接种环直接挑菌进行接种,会导致各个孔中接菌量差别很大,从而导致培养结果有所差异(如图2-a、图2-b)。

用菌悬液接种的试验结果(氨基酸对照管变黄,正确)

图2-a  用菌悬液接种的试验结果(氨基酸对照管变黄,正确)

用接种环挑菌接种的试验结果(氨基酸对照管紫色,异常)

图2-b  用接种环挑菌接种的试验结果(氨基酸对照管紫色,异常)


3、需要每个孔都换枪头吗?

  接种过程中,如果能保证每次往培养基孔中滴加菌液时,不会沾染枪头,则从头到尾用一个枪头即可;如果中间出现沾染,则需及时更换枪头;对于氨基酸和氨基酸对照孔,尽量不用同一个枪头,以免少量的沾染,影响试验结果。有的人会执意用接种针挑取菌体进行接种,这时候更要注意,每接种一个孔,都要进行烧环灭菌,主要是为了清除接种针或接种环上沾附的少量培养基,以免对后面孔的试验结果造成干扰。坚决不能用一个针挑取菌苔后,连续往鉴定条的每个孔中一次性接种完成。这样很可能造成生化结果的混乱或者试验失败。


4、讨论:

  对于菌种纯化,有些标准中也有描述,可以从选择性培养基平板上挑菌进行某项生化试验,如《GB 4789.4  食品安全国家标准  食品微生物学检验  沙门氏菌检验》中相关内容是这样描述的:

  但是为了保险,少走弯路,本人还是建议先进行纯化后,制成菌悬液再进行接种、培养。这样也不会因为某一两个孔的结果不好,而再重新使用一整套生化鉴定条,造成浪费。文中所列的几种异常情况,不一定每次都能碰到,但是如果不按正常操作进行试验,试验过程中出现各种这样或那样异常现象的几率会更大,阻碍试验进程。

  另外,为了保证结果的一致性和实效性,可以将菌液制备得尽量浓一些,也就是说每个孔中接菌量可适当加大。



HBI微生物生化鉴定条 

http://hopebiol.com/asphtml/HBIjd.htm


GB 4789.4-2016 沙门氏菌检验 -标准下载

https://www.hopebiol.com/biaozhun-download.asp?id=59


注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。


 

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