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芽孢杆菌培养基的补充介绍及注意事项

张宇名
录入时间:2023-7-25 16:09:12 来源:青岛海博生物

一、试验原理与介绍

  芽孢杆菌属细菌较大(4μm ~10μm),革兰氏阳性菌,是严格需氧或兼性厌氧的有荚膜的杆菌。芽孢杆菌属可分为以下亚群:多黏芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌(包括蜡样芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌)、短芽孢杆菌和炭疽芽孢杆菌。

  本培养基用于芽孢杆菌平板计数,葡萄糖为细菌生长提供碳源;氯化钾可以维持培养基均衡的渗透压;酵母提取物、硫酸铵为细菌生长提供氮源;磷酸钙有利于促进细菌芽孢的快速生成,硫酸锰、七水硫酸镁、硫酸亚铁提供细菌菌体生长以及芽孢生成所需的微量元素。


二、培养基配方(g/L)

葡萄糖

10.0

磷酸钙

5.0

硫酸铵

0.5

氯化钾

0.2

七水硫酸镁

0.1

硫酸锰

0.0001

硫酸亚铁

0.0001

酵母提取物

0.5

琼脂

20.0

pH 7.0±0.2(25℃)


三、试验方法

  1、称取本品36.3g,加热溶解于1000mL蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌30分钟备用。

  2、制备菌种悬液,接种至芽孢杆菌培养基上。

  3、放置于36℃±1℃恒温培养箱中,需氧培养48h-72h。


四、质控要求

  接种以下质控菌株,放置36℃±1℃恒温培养箱中,需氧培养48h-72h。菌株培养结果见图1。

质控菌株

菌株编号

接种量(CFU)

回收率

生长情况

其他特征

蜡样芽孢杆菌

CMCC(B) 63303

20-200

≥70%

+++

白色小菌落

枯草芽孢杆菌

CMCC(B) 63501

20-200

≥70%

+++

白色小菌落


图1 芽孢杆菌培养基的微生物质控结果

图1 芽孢杆菌培养基的微生物质控结果


五、注意事项

  1、该培养基中含不溶性磷酸钙,高压灭菌后存在白色沉淀,倒平板前需充分摇匀培养基,重悬磷酸钙均匀分布于培养基中,再进行倒平板操作,以免造成平板白色背景不均匀,影响试验结果。

  2、该培养基倒板后平板整体呈白色,在试验完毕读取菌数时可能发生不易辨别计数的情况,可采用置于灯检箱或打光等方式进行辅助读数。

  3、芽孢杆菌在挑菌置于稀释液中振荡分散的过程中,菌苔不易散开,不易形成均匀态菌悬液,这可能导致后续稀释涂布结果菌数不稳定或涂布菌数不易掌握,可以通过缩小相邻稀释度的稀释倍数,进行多梯度稀释度涂布,设立多组平行对照等方式,得到所需的涂布菌数范围,保证试验的有效性。


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注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。

 

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