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厌氧培养时应注意的事项

王天宇
录入时间:2024-6-7 14:55:56 来源:青岛海博生物

  厌氧细菌,是指能够在无氧条件下生活的一类细菌。其又分为兼性厌氧菌(在有氧或无氧环境中均能生长的细菌)和专性厌氧菌(氧气对其有毒害作用,只能在没有氧气的环境中才能生长)。本文主要介绍专性厌氧菌在培养时应注意的细节。


  经常会有客户咨询我们关于厌氧培养的问题,例如为何自己购买的厌氧菌株培养不出来;分离培养厌氧菌时,应该如何培养,应选择何种培养基。往往排除掉其设备问题(如厌氧培养箱自身的问题)和试剂问题后,发现是在厌氧培养的某些细节上出现了问题,导致厌氧培养效果不佳。


  在培养基选择方面,若参考的标准有明确指出使用何种培养基,则应使用相应的培养基进行培养。若无明确指出应使用的培养基,一般建议使用HB8518-1 GAM培养基,该培养基营养丰富,且含有硫乙醇酸钠和L-半胱氨酸有助于维持培养基的无氧环境,只需在表层覆盖一层石蜡便可达到较好效果。若需要培养的细菌对营养要求不高且实验室不具备厌氧培养所需的环境或缺少石蜡等试剂,则可使用HB5190 液体硫乙醇酸盐培养基,该培养基培养厌氧菌时无需覆盖石蜡,也无需将培养基放在厌氧培养袋或厌氧培养箱中。


   在培养基的配置过程中,若使用液体培养基,则尽量在高压灭菌之前分装试管,若需覆盖石蜡的培养基也推荐在灭菌前添加。因为配置后的液体中含有较多的溶解氧,而高压灭菌时,这些溶解在液体中的溶解氧则会排出。若在灭菌结束后分装试管或再覆盖石蜡,则会让氧气重新进入液体之中,有可能会造成厌氧菌无法生长。这点在配置液体硫乙醇酸盐培养基时非常明显,因培养基含有氧气指示剂刃天青,若在锥形瓶中高压灭菌后分装试管,则会观察到试管通体呈粉红色(表示有氧气存在),需静置待到试管重新分层或加热驱氧后使用。若已经因操作不当导致液体中溶解氧过多,可不覆盖石蜡(因为石蜡会阻止液体和空气的气体交换,即使外部为无氧环境也不能让液体中氧气排出),选用透气性较好的试管塞,直接将试管置于厌氧培养箱或厌氧培养袋中使用。


液体硫乙醇酸盐培养基顶部粉红色的氧化层,生孢梭菌只在氧化层之下生长


 若使用固体培养基进行分离培养,则应注意自己所用的空平皿透气性是否良好,若平皿盖与平皿本身连接过于紧密,则可能导致在厌氧培养时平皿内氧气封闭在平皿内,造成厌氧菌生长不佳。


  最后,应选择品质可靠的厌氧包,保证其在短时间内便可使厌氧培养袋中达到无氧环境。若使用厌氧培养袋或培养盒则在培养之前应确保厌氧培养袋封口扣紧、厌氧盒盒盖扣紧,且使用了对应体积的厌氧包去除袋中氧气(如使用2.5L培养袋则应选用2.5L厌氧产气包),一般厌氧包都留下了部分体积余量,可以确保所标体积的空间达到无氧状态。此处应补充说明的是,若需要微需氧环境培养,则需要使用固定体积的培养盒,因为微需氧产气包进行了精确的计算,若使用不固定体积的厌氧培养袋,则可能会达不到相应的气体环境。


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注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。

 

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