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霍乱弧菌——流行病学分型技术



录入时间:2012-2-20 16:46:14 来源:互联网

    霍乱弧菌(V.cholerae)污染食品,可引起食源性疾病的暴发。主要表现为剧 烈的呕吐,腹泻,失水,死亡率甚高。属于国际检疫传染病。

    流行病学分型技术: 

    生物型的鉴别

    第Ⅳ组噬菌体(106/毫升)裂解试验:第Ⅳ组霍乱噬菌体常规稀释液(106/毫升)一般只裂解霍乱弧菌古典型,而不裂解埃尔托型(有少数例外)。第Ⅳ组霍乱噬菌体原液(109/毫升)对古典型、埃尔托型均能裂解。 

    多粘菌素B敏感试验:在冷却至约50℃的普通琼脂中加入多粘菌素B(50单位/毫升),混合后制成平板。然后将2-3小时的菌培养物一环接种在平板。然后将2-3小时的菌培养物一环接种在平板表面,待干后置37℃培养过夜,观察结果。古典型敏感(不生长或生长不足10个菌落),埃尔托不敏感(多粘菌株形成菌苔)。也可用多粘菌素B纸片(50单位)按药敏感试验方法进行。

    鸡血球凝集试验:加一滴生理盐水于玻片上,挑取被检菌培养物于盐水中制成浓厚的菌悬液,取一滴2.5%鸡血球悬液混于菌悬液中,摇匀,一分钟内出现血球凝集者为阳性,血球呈均匀分散状态为阴性。埃尔托型为阳性,古典型一般为阴性。

    VP试验:将被检菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中,于37℃培养2-3天后,取出1毫升加5%α-奈酚酒精溶液0.6毫升,震荡5秒钟,再加入40%氢氧化钾0.2毫升,再震荡5秒钟,于室温中放置2-5分钟,1小时内出现红色者为阳性。古典型为阴性,埃尔托型多为阳性。
    噬菌体、生物分型:为区别埃尔托型的两类不同菌株(流行株与非流行株)和不同菌型,对不同来源的菌株进行分型,可追溯病原的来源。

    噬菌体分型:根据5株噬菌体(VP1-VP5)可将埃尔托弧菌分成32个噬菌体型,常见的流行株为噬菌体1型(对5株噬菌体型全敏感)、3~5型,2型主要是1型的粗糙型,6型以后属非流行株。
    埃尔托弧菌生物分型:根据菌株的溶原性、对溶原噬菌体的敏感性、山梨醇发酵和溶血试验等生物学性状可将埃尔托弧菌分成12个生物型。

    噬菌体-生物分型:将噬菌体分型与生物分型结合起来,每个噬菌体又可分为几个生物型,即噬菌体-生物分型,如1a、1b、8i等。常见的流行株为噬菌体1~3型,生物型为a~d,非流行株为噬菌体6~32型,生物型为g~l。通过噬菌体-生物分型,可以了解该地区菌型组成和分布情况。

 

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