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创伤弧菌的初步检测


3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂
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实验操作:
1、样品制备:按照标准进行取样。
2、增菌:按标准方法进行增菌,培养后PNCC增菌液混浊。
3、分离:用10 μL接种环在距离PNCC增菌液的液面下1 cm沾取一环增菌液,分别划线接种于CC和mCPC平板,于36℃±1℃条件下培养18 h±1 h。
典型的创伤弧菌可以发酵纤维二糖产酸使培养基变黄,所以在CC和mCPC平板上的形态为:圆形、扁平,中心不透明但边缘透明的黄色菌落
4、分纯培养
从CC平板和mCPC平板上各挑取至少5个创伤弧菌可疑菌落,分别接种于3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板上,36℃±1℃培养18 h±1 h后用于后续鉴定。
创伤弧菌在3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板上应为:直径1 mm~2 mm,圆形、乳白色菌落。

结果观察:
挑取分纯后的同一个单菌落,进行以下4项鉴定实验。
革兰氏染色镜检 、氧化酶试验 、三糖铁试验 、嗜盐性试验(革兰氏染色和氧化酶实验详见往期视频)
①革兰氏染色镜检:革兰氏阴性,棒状、弧状、卵圆状等多种形态,无芽胞。
②氧化酶试验:氧化酶试纸变蓝,为阳性。
③三糖铁试验:挑取纯化后的同一个单菌落,划线接种于3%氯化钠三糖铁琼脂斜面并穿刺底层,36℃±1℃培养24 h,观察结果。试管底层变黄,无气泡,斜面颜色不变黄。
④嗜盐性试验:挑取纯化后的同一个单菌落分别接种于含有0%、3%、6%、8%、和10%氯化钠的胰蛋白胨水中,36℃±1℃培养24 h,观察液体的混浊情况。
创伤弧菌在含有0%、8%、和10%氯化钠的胰蛋白胨水中不生长或微弱生长,胰蛋白胨水澄清透亮或稍混浊,而在3%和6%氯化钠的胰蛋白胨水中生长旺盛,胰蛋白胨水混浊。


后续还需要进行确证鉴定进行进一步确认,敬请期待后续视频!



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