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创伤弧菌的检验(合集)


3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂
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初步检测:
1、样品制备:按照标准进行取样。
2、增菌:按标准方法进行增菌,培养后PNCC增菌液混浊。按照标准流程进行取样,并使用PNCC增菌液进行增菌。然后进行分离。
3、分离:用10 μL接种环在距离PNCC增菌液的液面下1 cm沾取一环增菌液,分别划线接种于CC和mCPC平板,于36℃±1℃条件下培养18 h±1 h。典型的创伤弧菌可以发酵纤维二糖产酸使培养基变黄,所以在CC和mCPC平板上的形态为:圆形、扁平,中心不透明但边缘透明的黄色菌落。

4、分纯培养

从CC平板和mCPC平板上各挑取至少5个创伤弧菌可疑菌落,分别接种于3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板上,36℃±1℃培养18 h±1 h后用于后续鉴定。

 创伤弧菌在3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板上应为:直径1 mm~2 mm,圆形、乳白色菌落。

5、鉴定

(1)初步鉴定:挑取分纯后的同一个单菌落,进行以下4项鉴定实验。

①革兰氏染色镜检 ②氧化酶试验 ③三糖铁试验 ④嗜盐性试验

革兰氏染色和氧化酶实验详见往期视频,创伤弧菌应为:.....

①革兰氏染色镜检:革兰氏阴性,棒状、弧状、卵圆状等多种形态,无芽胞。

②氧化酶试验:氧化酶试纸变蓝,为阳性。

③三糖铁试验:挑取纯化后的同一个单菌落,划线接种于3%氯化钠三糖铁琼脂斜面并穿刺底层,36℃±1℃培养24 h,观察结果。

试管底层变黄,无气泡,斜面颜色不变黄。

④嗜盐性试验:挑取纯化后的同一个单菌落分别接种于含有0%、3%、6%、8%、和10%氯化钠的胰蛋白胨水中,36℃±1℃培养24 h,观察液体的混浊情况。

创伤弧菌在含有0%、8%、和10%氯化钠的胰蛋白胨水中不生长或微弱生长,胰蛋白胨水澄清透亮或稍混浊,而在3%和6%氯化钠的胰蛋白胨水中生长旺盛,胰蛋白胨水混浊



确证鉴定:

1、将初步鉴定为创伤弧菌的疑似菌落接种在3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板上,36℃±1℃培养18 h±1 h。2、取一支3%氯化钠VP半固体生化管掰开,备用,挑取纯培养的菌落穿刺接种于生化管中,36℃±1℃培养24 h~48 h。然后滴加vp试剂A液和B液0.5-4h后观察结果。

3、挑取一环再次经过纯化的可疑菌落至生理盐水管中,振荡混匀制成菌悬液,然后用移液枪吸取100uL菌悬液接种于含3%氯化钠的赖氨酸脱羧酶生化管中,然后吸取适量液体石蜡,覆盖表层。36℃±1℃培养24 h。4、另取一环纯培养的可疑菌落接种于3%氯化钠三糖铁琼脂斜面,36℃±1℃培养18 h。培养结束后,挑取三糖铁斜面上的菌落,接种于ONPG生化管中,36±1℃需氧培养24小时。


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