1.培养基

   （1）休和利夫森二氏培养基

     pH 7.0-7.2,分装试管，培养基高度约4.5cm, 115℃蒸气灭菌20min。

   （2）博德和霍尔二氏培养基

     pH 7.0-7.2,分装，灭菌同上。

2.接种

  （1）以18-24h幼龄菌种作种子，穿刺接种，每株4支。

  （2）其中2支用灭菌的凡士林石蜡油（熔化的2/3凡士林中加入1/3液体石蜡，高压灭菌）封盖，约0.5-lcm厚，以隔绝空气为闭管。另2支不封油为开管，同时还要有不接种的闭管和开管作对照。

  （3）适温培养1,2,3,7,14天观察结果。

3. 结果检查

  （1）只有开管产酸变黄者为氧化型；开管和闭管均产酸变黄者为发酵型。

  （2）本实验可同时观察细菌的运动性，观察运动性时琼脂软硬必须合适，我们所用的琼脂（海燕牌琼脂条）以0.5%-0.6％为宜，其他牌号的琼脂则须经实验决定使用浓度。琼脂的浓度以放倒试管不流动，轻轻敲打则琼脂柱破碎为宜。

  （3）如培养基制好后，在温度较低的地方存放，在使用前应在沸水中融化，并用冷水速凝后立即使用。否则溶于培养基中的空气会干扰观察发酵产酸的结果。

  本文节选自《常见细菌系统鉴定手册》第十四章。