1.方法一

   (1)培养基

   灭菌后调pH至6.8-6.9使培养基呈橘黄色或微带粉红色为宜，分装试管，分装散以适于摆斜面为度，l15℃蒸气灭菌30min。20％的尿素溶液过滤灭菌后，待基础培养基冷却到50-55℃时，将灭菌的尿素溶液加到培养基中，终浓度为2%，然后摆成较大的斜面。

   (2)结果观察

   接种后适温培养，分别于2h、4h过夜观察。阴性结果要观察4天，培养基呈桃红色者为阳性，培养基颜色不变者为阴性。

   (3)注意事项

   ①该实验应有不加尿素的空白对照（尤其是测定假单胞菌时）；②应该有已知的阳性菌对照。

2.方法二

   将测定菌接在营养琼脂斜面上，在第3天和第7天进行脲酶的测定。方法是：在空试管中，将斜面菌苔做成2ml浓菌悬液，加入一滴酚红指示剂，调pH到7,即酚红刚刚转黄呈橙红色，再将此菌悬液分作两份，在其中的一管加入少许结晶的尿素约0.05-0.1g,另一管不加尿素作为对照。如加尿素的试管的几分钟变碱，酚红指示剂变红，则表示测定菌为脲酶阳性。不变者，则为阴性。

   本文节选自《常见细菌系统鉴定手册》第十四章。