一、简介

  微生物培养基的pH值是影响微生物生长、代谢和产物合成的关键因素之一。准确的pH测定不仅有助于优化培养条件，还能确保实验结果的可靠性和重复性。然而，pH测定过程中存在许多潜在的影响因素，若不加以注意，可能导致测量误差，进而影响实验结果。本文综述了微生物培养基pH测定中的关键注意事项，以期为实验人员提供参考。

二、pH计的校准与维护

  pH计是测定培养基pH值的核心工具，其准确性直接关系到测量结果的可靠性。因此，在使用pH计之前，必须进行严格的校准。校准时应使用标准缓冲液（如pH4.0、pH6.86和pH9.18），并根据测量范围选择合适的缓冲液。此外，温度对pH值的影响不可忽视，因此pH计应具备温度补偿功能，或在测量时将培养基温度控制在接近培养条件的温度（通常为25℃）。

  pH计的电极是其核心部件，其状态直接影响测量结果。使用前后，电极需用去离子水彻底清洗，以避免交叉污染。长期不使用时，电极应按照说明书保存在专用保存液或缓冲液中，以防止电极干燥或损坏。此外，电极表面可能会因培养基中的蛋白质、硫化物等成分而污染，因此需定期清洁和维护，以保持其灵敏度和准确性。

三、培养基样品的准备与测量

  在测定培养基pH值之前，样品的准备至关重要。首先，培养基必须充分混匀，以确保其pH值分布均匀。局部pH差异可能导致测量结果不准确，尤其是在高粘度或含有不溶性成分的培养基中。其次，培养基的温度应接近实际培养条件，因为温度变化会影响pH值。通常，建议在25℃左右进行测量，并在记录pH值的同时记录测量温度，以便后续分析。

  在测量过程中，需注意避免气泡附着在电极表面，因为气泡会干扰电极与培养基的接触，导致读数不稳定。此外，pH计的读数通常需要几秒到几分钟才能稳定，因此应等待读数稳定后再记录结果(如图1)。

图1 pH计读数时的状态

  对于颜色较深或含有不透明成分的培养基，光学pH计可能无法准确测量，此时应选择电极式pH计。对于固体琼脂培养基，应选用测固体培养基pH专用的电极进行测定（如图2）

图2 测定固体和液体培养基的pH计电极示例

四、培养基成分对pH测定的影响

  微生物培养基的成分复杂，某些成分可能对pH测定产生干扰。例如，培养基中的蛋白质、硫化物或高浓度盐类可能影响电极的性能，导致读数不准确。因此，在选择pH计时，应考虑培养基的成分特性，并选择适合的电极类型。此外，某些培养基可能含有缓冲体系，这些缓冲体系在测量过程中可能会与电极发生反应，影响测量结果。因此，在测定前应了解培养基的组成，并采取相应的措施以减少干扰。

五、数据记录与质量控制

  准确的记录是实验可重复性的基础。在测定pH值后，应立即记录结果，并同时记录测量时的温度、培养基批次等信息。这些信息有助于后续的数据分析和问题排查。此外，为了确保测量结果的准确性，建议进行多次重复测量，并取平均值作为最终结果。对于关键实验，还可以使用已知pH值的对照样品进行验证，以确保pH计的准确性。

六、安全操作与废弃物处理

  在pH测定过程中，实验人员需注意个人安全。某些培养基可能含有有害物质，因此在操作时应佩戴手套和护目镜，避免直接接触培养基或缓冲液。此外，废弃的培养基和缓冲液应按照实验室的规定进行处理，以避免对环境造成污染。

七、总结

  微生物培养基的pH测定是微生物实验中的重要环节，其准确性直接关系到实验结果的可靠性。通过严格的pH计校准、规范的样品准备、注意培养基成分的干扰、准确的数据记录以及安全的操作流程，可以显著提高pH测定的准确性。实验人员应充分认识到pH测定中的潜在问题，并采取相应的措施加以避免，以确保实验的成功和数据的可靠性。

  总之，微生物培养基pH测定虽然看似简单，但其背后涉及许多细节和注意事项。只有在每一个环节都做到严谨和规范，才能获得准确可靠的实验结果，为微生物学研究提供坚实的基础。

注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。