中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服热线:400-0532-596

aboutus

沙门氏菌检验(三)生化实验


点击下载清晰视频

首先,进行三糖铁试验和赖氨酸脱羧酶试验。
煮沸三糖铁琼脂培养基2-3次,分装试管后于121℃高压灭菌锅中灭菌15分钟,此后制成高层斜面,斜面与底层比例为2:3。(注意:若培养基灭菌前不煮沸会造成琼脂溶解不完全,在制备斜面时会出现不凝固或凝固不完全的现象。)
自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落(示例BS平板上有两种疑似菌落),接种三糖铁琼脂,先在斜面划线,再于底层穿刺(注意若先穿刺再划线可能会导致含菌量太高,干扰结果判别);
接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基(同时做氨基酸脱羧酶对照试验,均加灭菌石蜡覆盖培养基液面)和营养琼脂平板,于36℃±1℃培养18 h~24 h,必要时可延长至48 h。本管变紫色,对照管变黄色,为阳性;本管与对照管均变黄色为阴性。
三糖铁试验现象观察:若为黄色,则为产酸,记为A;若为红色,则为产碱,记为K;若底层变黑,则为硫化氢阳性;若出现气泡或断层,则为产气阳性。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内,沙门氏菌属的反应结果见表2。可知BS平板上的两种(菌1和菌2)菌株均为可疑沙门氏菌属。

之后,进行靛基质试验、尿素酶试验、氰化钾试验
从营养琼脂平板上挑取单个菌落至无菌生理盐水中,混匀细菌悬液,每个生化管加入100 μL菌悬液。于36 ℃±1 ℃培养18 h~24 h,必要时可延长至48h,注意蛋白胨水试验结果观察前需加Kovacs氏靛基质试剂2-3滴,有红色环为阳性,不变色或黄色为阴性;尿素琼脂红色为阳性,不变色或黄色为阴性;进行氰化钾试验的同时需做氰化钾试验对照,氰化钾对照生长,溶液变浑浊时,氰化钾不生长为阴性,生长为阳性。
之后按表3判定结果。将已挑菌落的平板储存 于2 ℃~5 ℃或室温至少保留24h,以备必要时复查。

由表3可知,菌1表现为A1序号且无异常项,因此判定为沙门氏菌属,如尿素、KCN 和赖氨酸脱羧酶3项中有1项异 常,按表4可判定为沙门氏菌。如有2项异常为非沙门氏菌。

菌2表现为A3序号,需补做ONPG。ONPG黄色或深黄色为阳性,无色为阴性。ONPG阴性为沙门氏菌,同时赖氨酸脱羧酶阳性,甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。由于菌2为ONPG阴性且为赖氨酸脱羧酶阴性,因此为甲型副伤寒沙门氏菌。
此外,若疑似菌株表现为A2序号,需补做甘露醇和山梨醇试验,沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性,但需要结合血清学鉴定结果进行判定。

首页 | 关于我们 | 网上商城 | 在线客服 | 联系我们
业务联系电话
   400-0532-596 0532-66087773
   0532-66087762 0532-81935169
邮箱:qdhbywg@vip.126.com
地址:青岛市城阳区锦汇路1号A2栋
产品技术咨询
  工作日(周一至周六8:00-18:00):
  18562658263 13176865511
  其它时段:13105190021
投诉与建议:13105190021 13006536294