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三糖铁实验操作视频


三糖铁琼脂(TSI)
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三糖铁实验操作视频 简介:
三糖铁试验常用于沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌等致病菌的生化鉴定和初筛。相比较于克氏双糖铁,三糖铁中增加了蔗糖,扩大了非目标菌的排除范围,增加了初筛的能力。
注:做弧菌的生化鉴定时,通常使用含1%或3%氯化钠的三糖铁琼脂。
第一步:培养基制备
若使用干粉培养基自行制备三糖铁斜面需要注意配时一定要加热煮沸并不停搅拌至琼脂完全溶解,才能分装试管。不然会因为琼脂没有完全溶解,造成有些试管不凝固,或凝固不完全的情况。
将分装好的试管放入灭菌锅灭菌。
灭菌结束后,将试管摆成高层斜面状,斜面/底层 ≈ 2/3 
若使用一次性塑料试管,则需将培养基灭菌后再进行无菌分装,摆高层斜面。(画面:一次性塑料试管图片)。
也可直接使用海博生物成品三糖铁管进行实验,免去繁琐的配制过程。
第二步:接种待测菌
用接种挑取待测菌落,在斜面上“之”字形划线,再于底层穿刺(穿刺底层深度2/3左右即可),
培养过程中必须确保试管透气性良好,使用成品三糖铁管时不可将盖子盖紧
之后将培养基置于36±1℃培养18-24h后,观察结果。
现象观察
斜面或底层
若为红色,则为产碱,常用“K”表示;
若出现变黄,则为产酸,常用“A”表示;
底层若有变黑出现,则为硫化氢阳性;
若底层出现气泡或琼脂出现断层,则为产气阳性。
斜面红、底层黄的K/A型:此类细菌仅能发酵葡萄糖产酸,不能发酵乳糖和蔗糖,如大多数的沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌等;
斜面和底层均为黄色的A/A型:此类细菌则至少能发酵乳糖和蔗糖其一,如大肠杆菌、普通变形杆菌、霍乱弧菌等;
斜面和底层均为红色的K/K型:此类细菌通常不能发酵葡萄糖或仅能有氧分解葡萄糖,如铜绿假单胞菌、粪产碱杆菌等;
多数沙门氏菌、大肠杆菌、变形杆菌可以产气,出现气泡或断层;
产硫化氢的沙门氏菌和变形杆菌等底部可以观察到变黑现象。

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