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大肠埃希氏菌计数(一)样品处理和初发酵试验


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一、样品稀释
1.固体和半固体样品:称取25 g样品,放入盛有225 mL磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内, 8000 r/min~10000 r/min均质1 min~2 min,制成1:10样品匀液,或放入盛有225 mL磷酸盐缓冲液的无菌均质袋(HBJ001含225ml磷酸盐缓冲液均质袋)中,用拍击式均质器拍打1 min~2 min制成1:10的样品匀液。
2.液体样品:以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品匀液。
注意:样品匀液的pH值应在6.5~7.5之间,必要时分别用1 mol/L NaOH或1 mol/L HCl调节。
3.用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1 mL,沿管壁缓缓注入9 mL磷酸盐缓冲液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支1 mL无菌吸管或吸头反复吹打,使其混合均匀,制成1:100的样品匀液。
二、初发酵试验
每个样品,选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液),每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤每管接种1 mL(如接种量超过1 mL,则用双料LST肉汤),36℃±1℃培养24 h±2 h。
三、结果观察
观察小倒管内是否有气泡产生,24 h±2 h产气者进行复发酵试验,如未产气则继续培养48 h±2 h。产气者进行复发酵试验。

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