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肠杆菌科检验(二)确证实验及计数方法


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典型菌落的确认
肠杆菌科典型菌落为有或无沉淀环的粉红色至红色或紫色菌落,选取典型菌落数在15 ~150 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板进行计数,从每个平板上至少挑取5个典型菌落,分别划线接种于营养琼脂平板上,36℃±1℃培养18h~24h,纯化后的平板上菌落应形态大小一致,之后挑取平板上的菌落进行革兰氏染色镜检、氧化酶试验及葡萄糖发酵试验。
确证实验
革兰氏染色镜检:肠杆菌科为革兰氏阴性杆菌,无芽孢,大小为(0.3~1.0) μm×(1.0~6.0) μm。
氧化酶试验:用一次性接种环或玻璃棒挑取单个菌落涂于浸湿氧化酶试剂的滤纸上,滤纸的颜色在10s内变成蓝紫色,判为阳性反应,不变色为阴性反应,肠杆菌科细菌应为氧化酶阴性。
葡萄糖发酵试验:挑取少许氧化酶阴性的同一个菌落,穿刺于葡萄糖琼脂内,于36℃±1℃培养24 h±2 h,若试管内的内容物变为黄色,判为阳性反应。肠杆菌科细菌应为葡萄糖阳性。
计数方法
之后按照视频中不同情况的计数方法进行计数。

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