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双抗巧克力琼脂平板的制备方法


双抗巧克力琼脂培养基

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双抗巧克力琼脂平板的制备方法双抗巧克力琼脂培养基用于嗜血杆菌和奈瑟氏菌等苛养菌的培养,需要加入脱纤维羊血和万古霉素,多粘菌素B进行制备。
1.按照产品标签说明,称取8.8 g双抗巧克力琼脂干粉。
2.倒入盛有200 mL纯化水的搪瓷缸中,然后用玻璃棒不停搅拌,直到干粉完全溶解。
3.之后将搪瓷缸放置于电磁炉上,一边加热,一边搅拌,当液面完全沸腾后,立即将搪瓷缸从电磁炉上拿开,为第一次煮沸,当液面回落后立即放回电磁炉加热,重复加热煮沸,共煮沸2-3次,之后倒入三角瓶中,包好。
4.放置于高压灭菌锅中,121℃灭菌15分钟。
5.灭菌结束后,取出培养基,待培养基冷至50℃左右时,用移液枪吸取14 mL无菌脱纤维羊血(添加量为7%),缓慢加入三角瓶中,不断摇晃使其与培养基充分混匀;将三角瓶放置于80℃水浴中加热10 min左右,不停摇动,直至培养基颜色变成棕色(巧克力色)。
6.待培养基冷至45℃-50℃时,用移液枪吸取一支双抗巧克力琼脂添加剂(含万古霉素0.66 mg,多粘菌素B 0.84 mg),缓慢加入三角瓶中,并不断摇晃使其与培养基充分混匀,倾入无菌平皿,备用。
7.配制好的双抗巧克力平板应为巧克力色固体,表面平整。
检验原理
双抗巧克力琼脂培养基用于嗜血杆菌和奈瑟氏菌等苛养菌的培养,各种消化物和酵母浸出粉提供碳氮源、维生素和生长因子;淀粉能促进奈瑟氏菌的生长;氯化钠维持均衡的渗透压;多粘菌素、万古霉素抑制了革兰氏阳性菌的生长,更有利于嗜血杆菌和奈瑟氏菌的生长;琼脂是培养基的凝固剂;脱纤维羊血提供氯化血红素和辅酶I,血液中还含有V、X因子,这两种因子是位于红细胞中的,一般细菌不能利用,轻微的加热(一般为75℃~85℃左右)使红细胞破坏释放出V、X因子。
注意事项
1.无菌脱纤维羊血必须提前从冰箱中取出,待其恢复至室温后使用。
2.加入羊血和抗生素时需注意不断摇晃三角瓶,使其与培养基充分混匀。
3.80℃水浴中加热后可以不加双抗巧克力琼脂添加剂(含万古霉素0.66 mg,多粘菌素B 0.84 mg),直接倒平板,即为巧克力琼脂平板,也可用于培养苛养菌。

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