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大肠埃希氏菌计数(三)生化鉴定及结果报告


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一、生化鉴定
(1)革兰氏染色结果:大肠埃希氏菌为革兰氏阴性杆菌
(2)对纯培养物进行靛基质试验、MR-VP试验和柠檬酸盐利用试验。
挑取1-2个纯培养的菌落至无菌生理盐水管中充分振荡混匀制成均一的菌悬液,打开生化鉴定条的盖子,用75%酒精擦拭打孔器,用打孔器开孔或直接把膜撕掉;鉴定条每个孔中加入100 μL菌悬液。注:每条鉴定条含两组生化,可鉴定两个典型或可疑菌落。放置36℃±1℃培养。
靛基质试验:需在培养结束后滴加靛基质试剂,立即或数秒内出现玫红色环为阳性反应,黄色环为阴性反应
甲基红试验:需在培养结束后滴加甲基红试剂,立即显红色为阳性反应,橙黄色为阴性反应;
V-P试验需在培养结束后滴加V-P试剂,继续培养4h,如出现变红现象即为阳性反应,不变红为阴性反应;
西蒙氏枸橼酸盐可直接观察结果,如出现变蓝即为阳性反应,不变色为阴性反应。
二、分离操作
将浑浊产气的EC肉汤管混匀,取一环菌液,划线至EMB平板(每个EMB平板编号与EC肉汤管编号对应);同时划线标准阳性菌大肠埃埃希氏菌,同步培养作为对照。36℃培养18-24h。
三、结果报告
典型大肠埃希氏菌为++--,非典型大肠埃希氏菌-+--,统计出现以上结果的LST管的管数,查询MPN表,报告每g(ml)样品中大肠杆菌的MPN值。

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