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小肠结肠炎耶尔森氏菌检验


CIN-1培养基基础

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小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica),简称小肠耶尔森氏菌,是革兰氏阴性杆菌或球杆菌。本菌不形成芽胞,无荚膜,有鞭毛;但其鞭毛在30℃以下培养条件形成,温度较高时即丧失,因此表现为30℃以下有动力,而35℃以上则无动力。该菌是能在冷藏温度下生长的少数几种肠道致病菌之一,在4℃条件下能保存和繁殖。
1. 分离:用接种环取乳与乳制品增菌液或经过碱处理的其他食品增菌液分别划线接种于CIN-1琼脂平板和改良Y琼脂平板,26℃±1℃培养48 h±2 h。典型菌落在CIN-1上为深红色中心,周围具有无色透明圈(红色牛眼状菌落),菌落大小为1 mm~2 mm,在改良Y琼脂平板上为粉红色透明、不黏稠的菌落。
2. 改良克氏双糖试验:分别从选择性平板挑取可疑菌落3个~5个,接种于改良克氏双糖铁琼脂,先在斜面划线,再于底层穿刺,26℃±1℃培养24 h,选择斜面和底部皆变黄且不产气的培养物做进一步的生化鉴定。
3. 尿素酶试验和动力观察:用接种环挑取一满环可疑培养物,接种到尿素培养基中,接种量应足够大,振摇几秒钟,26℃±1℃培养2 h~4 h。将尿素酶试验阳性菌落分别接种于两管半固体培养基中,于26℃±1℃和36℃±1℃培养24 h。将在26 ℃有动力而36℃无动力的可疑菌培养物划线接种营养琼脂平板,进行纯化培养,用纯化物进行后续的鉴定。
4. 革兰氏染色镜检 :将纯化的可疑菌进行革兰氏染色。小肠结肠炎耶尔森氏菌呈革兰氏阴性球杆菌,有时呈椭圆或杆状,大小为(0.8 μm~3.0 μm)×0.8 μm。
5. 生化鉴定:打开V-P生化管,用接种针从纯化平板上挑取单个菌落接种至生化管中,相同方法接种其他生化管,氨基酸生化管需要加入100 μL无菌石蜡覆盖,放置于26℃±1℃培养。 小肠结肠炎耶尔森氏菌的主要生化特征:V-P试验阳性,鸟氨酸脱羧酶+,蔗糖+(有不同的生化型),棉子糖-,山梨醇+,甘露醇+,鼠李糖-。

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