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培养基的检验与验收(五)选择性液体计数培养基的检验与验收


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一、选择性液体计数培养基的介绍
在GB4789.28中,列举了三个选择性液体计数培养基:月桂基硫酸盐胰蛋白胨大豆肉汤(LST)、煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)和EC肉汤,此类培养基主要用于特定菌株的MPN法计数,培养基本身具有一定的选择性,同时目标菌在培养基中可观察到产气反应,以此进行判断所检目标菌是否存在。
二、培养基的出厂检验
首先,将待测培养基(本次以BGLB培养基为例进行讲解)。按照说明书进行配制及灭菌,注意每管中需加入一个小倒管,用来观察是否产气。
使用前应观察倒管内是否存在气体,若倒管内存在气体,应排气后再使用。
1.目标菌的检验
按照GB4789.28标准,本次目标菌为大肠埃希氏菌和弗氏柠檬酸杆菌。
选择稀释至适宜梯度的目标菌的菌悬液(含菌量应在10-100CFU/mL,一般可选择 -7梯度的稀释样液),吸取1mL加入至待测培养基试管中,接种2支平行管。
同时使用TSA(或其他适宜培养基)进行倾注,计数接种量,吸取1ml菌液,加入空平皿中,倾入TSA,混匀,放置室温冷却,待凝固后,再倾入一层TSA,待其凝固后 , 置于标准中规定的条件下进行培养。
2.非目标菌的检验
选择稀释至适宜梯度的非目标菌的菌悬液,含菌量应在1000-5000CFU/mL,一般可选择 -5梯度的稀释样液),吸取1mL加入至待测培养基试管中,接种2支平行管,同时使用TSA(或其他适宜培养基)进行倾注(比接种梯度小1-2个稀释度),计数接种量。
3.结果判定
接种目标菌的试管浊度值应达到2,倒管内应有气体产生,气体充满倒管1/3以上。
接种非目标菌的试管浊度值应为0或1,无产气现象。
三、培养基的验收方法
将质控菌株(目标菌和非目标菌)都稀释至10-3,也可采用其他方法制备含菌量105-107CFU/mL的菌悬液,使用1μL接种环挑取1环菌液,接种至待测培养基中,置于标准规定的条件进行培养。
结果判定:接种目标菌的试管浊度值应达到2,倒管内气体充满1/3以上;接种非目标菌的试管浊度应为0或1,无产气现象。

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