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产气荚膜梭菌(二)纯化和确证


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1.按照《GB 4789.13 产气荚膜梭菌检验》,从样品中分离出的可疑菌落(TSC琼脂平板上显黑色)需要先进行纯化,再进行各种确证试验,最后根据确证结果,形成报告。
2.纯化
  用接种针,从平板上挑取黑色菌落,分别接种到 FTG 培养基,36 ℃±1 ℃培养18 h~24 h。
  用上述培养液涂片,革兰氏染色镜检并观察其纯度。产气荚膜梭菌为革兰氏阳性粗短的杆菌,有时可见芽孢体。
  如果培养液不纯,应划线接种 TSC 琼脂平板进行分纯,36 ℃±1 ℃厌氧培养 20 h~24 h ,再挑取单个典型黑色菌落接种到 FTG 培养基,36 ℃±1 ℃培养 18 h~24 h,用于后续的确证试验。
3.确证
  (1)牛奶发酵试验:
  取生长旺盛的 FTG 培养液 1 mL 接种于含铁牛乳培养基,在 46 ℃±0.5 ℃水浴中培养 2 h 后,每小时观察一次有无“暴烈发酵”现象,5 h 内不发酵者为阴性。
  (2)动力-硝酸盐试验:
  操作:用接种针取 FTG 培养液穿刺接种缓冲动力-硝酸盐培养基,于 36 ℃±1 ℃培养 24 h。在透射光下检查细菌沿穿刺线的生长情况,判定有无动力。
  然后滴加 0.5 mL 试剂A和 0.2 mL 试剂B以检查亚硝酸盐的存在。
  15 min 内出现红色者,表明硝酸盐被还原为亚硝酸盐;如果不出现颜色变化,则加少许锌粉,放置 10 min,出现红色者, 表明该菌株不能还原硝酸盐。
  产气荚膜梭菌无动力,能将硝酸盐还原为亚硝酸盐。
  (3)乳糖-明胶试验
  操作:用接种环(针)取 FTG 培养液穿刺接种乳糖-明胶培养基,于 36 ℃±1 ℃培养 24 h,观察结果。
  如发现产气和培养基由红变黄,表明乳糖被发酵并产酸。
  产气荚膜梭菌能发酵乳糖,使明胶液化。

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